Células madre espermatogoniales (SSC) de alpacas adultas fueron identificadas con marcadores moleculares (Zbtb16, Integrina β1) y mediante citometría de flujo (CF) bajo la intensidad de Dolichos biflorus como sDBA+ (SSC). Se congelaron fragmentos testiculares y suspensiones de células espermatogoniales en 18 medios conteniendo ACPs permeables (DMSO y DMA), ACPs no permeables (Trehalosa, Glucosa y Sucrosa), suplementados con Maca roja y negra. Se congelaron 44 muestras (fragmentos) y 32 (Células aisladas) mediante protocolos de congelamiento I y II respectivamente. Al comparar la viabilidad entre fragmentos y células postdescongelamiento, en muestras Buenas, con azul de Tripán se observó 75,81±3,25% de viabilidad en fragmentos vs 54,67%±4,07 en células aisladas en el medio MSA (p<0,05). Asimismo el porcentaje más alto observado en células aisladas fue de 57,24±4,11% vs 73,87...

La presente invención se refiere a un método de criopreservación de células madre espermatogoniales proliferadas y no proliferadas correspondiente a la especie Vicugna pacos mediante un proceso termocontrolado. La invención consiste en colocar células madre espermatogoniales (SSC) en un medio de criopreservación, y hacerlo pasar por un proceso termocontrolado de 4 °C a -7 °C a una tasa de 2 °C/min, luego mantener esta temperatura durante 11 minutos, y a continuación seguir congelando hasta -30 °C a una tasa de 0.3 °C/min, y por último llevar a la muestra a -84 °C a una tasa de 6 °C/min; el proceso de criopreservación sigue colocando la muestra en vapor de nitrógeno líquido por 12 horas, y finalmente sumergir en nitrógeno líquido. En cuanto a nuestro método, se logró obtener con azul de tripán una vitalidad promedio de 76.12 % en las células espermatogoniales posd...

The objective of this study was to use alternative cryoprotectans suitable for freezing epididymal spermatozoa of alpaca (Vicugna pacos) in a slow freezing method. Epididymides obtained in the slaughterhouse of Huancavelica city were transported at 4 °C in saline solution to the laboratory in Lima, Peru. The sperm cells were extracted from the epididymis and incubated in HAMF10 medium. The Tes-Tris-Yolk-Citrate medium was used and supplemented with the cryoprotectants dimethyl sulfoxide (Me2SO4) at 0.5, 0.25 and 0.125M concentrations, and dimethylacetamide (DMA) at 0.75, 0.385 and 0.18M concentrations, and compared with a control group cryopreserved with glycerol 0.6M. Motility, viability and integrity of membrane before and after freezing were assessed. The results showed a better viability and membrane integrity post-freezing when using DMA 0.375M (p<0.05). Motility was better with...

The objective of this study was to use alternative cryoprotectans suitable for freezing epididymal spermatozoa of alpaca (Vicugna pacos) in a slow freezing method. Epididymides obtained in the slaughterhouse of Huancavelica city were transported at 4 °C in saline solution to the laboratory in Lima, Peru. The sperm cells were extracted from the epididymis and incubated in HAMF10 medium. The Tes-Tris-Yolk-Citrate medium was used and supplemented with the cryoprotectants dimethyl sulfoxide (Me2SO4) at 0.5, 0.25 and 0.125M concentrations, and dimethylacetamide (DMA) at 0.75, 0.385 and 0.18M concentrations, and compared with a control group cryopreserved with glycerol 0.6M. Motility, viability and integrity of membrane before and after freezing were assessed. The results showed a better viability and membrane integrity post-freezing when using DMA 0.375M (p<0.05). Motility was better with...

La presente invención se refiere a un procedimiento para la preparación de un medio de criopreservación, en particular uno que es suplementado con maca para preservar tejidos en forma de fragmentos o biopsias testiculares; el cual comprende las siguientes etapas: a) Preparar un medio F10 de Ham (Ham's F10) modificado el cual en 500 ml contiene 4.9 g de Ham's F10, 0.0375 g de penicilina, 0.0375 g de estreptomicina, 0.1225 g de lactato de calcio, 2.73 g de Hepes, 0.168 g de bicarbonato de sodio, y es enrasado a 500 ml con agua ultrapura, el medio obtenido tiene pH 7.4; b) Suplementar el medio F10 de Ham modificado con 10% de dimetilsulfóxido (1.41 M) + 10 % de Suero Fetal Bovino + 200 mM de un azúcar del grupo de trehalosa o sucrosa + 20 mg/mL de extracto atomizado de Maca Negra; y c) Filtrar el medio esterilizado.

Referido a método de criopreservación de biopsia testicular que comprende: a) extraer la biopsia testicular, b) transferir a un contenedor con un medio con F10 de Ham modificado y suplementado con 10 % dimetilsulfoxido (1.41 M), suero fetal bovino, trehalosa 200 nM, extracto atomizado de maca negra 20 mg/mL, C) estabilizar la biopsia a 4° C por 1H en baño maría, d) colocarlo a un sistema de congelamiento termocontrolado de 4° C a -35° C, e) transferirlo a vapor de nitrógeno líquido por 12 H, f) sumergirlo al nitrógeno líquido. En donde los fragmentos testiculares pertenecen a Vicugna pacos.

The effect of six cryoprotective solutions based on MgCl2 and methanol, in addtion with sucrose and 10% Aloe vera gel or 10% egg yolk, on the sperm viability in spermatophore and sperm mass of Litopenaeus vannamei was evaluated. Besides, cooling rates of -0.5, -1 and -2 °C/min were used until temperature reached -35, -80 and -100 °C prior to immersion in liquid nitrogen. The sperm viability rate was determined by eosin-nigrosin staining. The results showed that the solutions based on MgCl2, sucrose plus egg yolk or Aloe vera gel better preserved sperm viability in spermatophore (82.8 ± 2.3% and 72.6 ± 3.1%) and in sperm mass (83.4 ± 2.5% and 76 ± 1.1%) without significant differences with the control group (p>0.05). The freezing curve showing less damage in spermatophore started from 25 °C and reached -35 °C with a rate of -1 °C/min using a cryoprotec...

The effect of six cryoprotective solutions based on MgCl2 and methanol, in addtion with sucrose and 10% Aloe vera gel or 10% egg yolk, on the sperm viability in spermatophore and sperm mass of Litopenaeus vannamei was evaluated. Besides, cooling rates of -0.5, -1 and -2 °C/min were used until temperature reached -35, -80 and -100 °C prior to immersion in liquid nitrogen. The sperm viability rate was determined by eosin-nigrosin staining. The results showed that the solutions based on MgCl2, sucrose plus egg yolk or Aloe vera gel better preserved sperm viability in spermatophore (82.8 ± 2.3% and 72.6 ± 3.1%) and in sperm mass (83.4 ± 2.5% and 76 ± 1.1%) without significant differences with the control group (p>0.05). The freezing curve showing less damage in spermatophore started from 25 °C and reached -35 °C with a rate of -1 °C/min using a cryoprotec...