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tesis de grado
Eficacia del péptido TSOL18 expresado en Pichia pastoris como vacuna contra la cisticercosis porcina
Publicado 2018
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Evalúa la protección en cerdos mediante el uso de dos vacunas recombinantes desarrolladas con el péptido TSOL18 de Taenia solium, con dos tipos de adyuvantes y dos esquemas de vacunación controlados en un ensayo de infección experimental. Cuarenta y nueve cerdos de dos meses de edad fueron distribuidos en los siguientes tratamientos: T1Vacuna IILTSOL18+ISA206V; T2Vacuna UMTSOL18+QuilA; T3Vacuna IILTSOL18+QuilA; T4Vacuna IILTSOL18+ISA206V; T5Control. La vacunación se realizó al día 0 y al día 23 de estudio para los cerdos de T2, T3 y T4, mientras que los cerdos de T1 fueron únicamente vacunados al día 23. Se realizó el desafío oral con proglótidos de Taenia solium al día 37 de estudio y los cerdos fueron mantenidos 12 semanas adicionales bajo condiciones controladas. Se realizaron pruebas de ELISA indirecto en suero sanguíneo para la detección de anticuerpos anti-TSOL18, ...
2
artículo
Publicado 2018
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The methylotrophic yeast Pichia pastoris is widely used as a eukaryotic system for expressing recombinant proteins. Over 500 recombinant proteins were expressed by P. pastoris with expression levels reaching up to 80% of total secreted proteins and up to 30% of total cell protein. The production process consists of a growth phase with glycerol and then an induction phase with methanol. Control culture conditions (pH, temperature, concentration of inducer, carbon and nitrogen source, etc.) are important for the growth of yeast to the production of the protein factors. On the other hand, malaria is a disease of great importance to global public health because of it is high prevalence mainly in tropical countries. In recent years there has been a breakthrough in the research of vaccines against Plasmodium species within the major antigenic proteins are the Antigen Membrane Apical (AMA) and ...
3
artículo
Publicado 2018
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The methylotrophic yeast Pichia pastoris is widely used as a eukaryotic system for expressing recombinant proteins. Over 500 recombinant proteins were expressed in P. pastoris with expression levels reaching up to 80% of total secreted proteins and up to 30% total cell proteins. There are three phenotypes of P. pastoris classified according to their ability to metabolize methanol, phenotype MutS grows slowly on media containing methanol at generally low concentrations of methanol and longer induction time are used. Therefore, the control of culture conditions such as concentration of the inducer and the induction time are important factors for both yeast growth and for production of the protein since this system is controlled by the AOX promoter induced with methanol. Furthermore, L-asparaginase (EC. 3.5.1.1) is an important biopharmaceutical used to treat acute lymphoblastic leukemia (A...
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tesis de maestría
Publicado 2023
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Analiza la obtención de la versión recombinante de ambas toxinas en la levadura Pichia pastoris por las ventajas que ofrece como las modificaciones postraduccionales y la formación de enlaces puentes disulfuro. El estudio inicia con la obtención del ARN (25 ± 55 ng/100 µ L)b la síntesis de ADN (1.6 a 4.8 ng ADN/ng ARN) y la posterior amplificación por PCR (reacción en cadena de polimerasa). Los amplicones fueron clonados en el vector pCR2.1cTOPO en células de Escherichia coli TOP10. La secuenciación confirma la obtención de Barnetobina y BaMtx junto con dos nuevas secuencias codificantes, BATXPLA3 (otra miotoxina de B. atrox) y BbtcSVSP2 (otra serinoproteinasa de B. barnetti). Se logra la subclonacion de Barnetobina y BaMtx en los vectores de expresión PICZac (que incluye una cola de polichistidina y un gen de resistencia al antibi7tico zeocina) y pPIC9 (con un gen de HIS4 c...
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tesis de grado
Publicado 2014
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La úlcera es una enfermedad crónica producida por un desequilibrio entre los agentes irritativos locales y mecanismos protectores de la mucosa, siendo la hipersecreción ácida un factor clave en su patogenia. En la Medicina Tradicional Peruana la especie Capsel/a bursa-pastoris (L) Medik, "Chichicara" es usada como infusión frente a este padecimiento. Objetivo: Validar el uso medicinal mediante modelos farmacológicos y determinar los tipos de metabolitos secundarios presentes. Metodología: La planta entera se recolectó mediante un muestreo no aleatorio en el poblado de Ccayau, provincia de Lucanas, región de Ayacucho; a la cual se le realizó el método de extracción por reflujo con etanol. Para los ensayos farmacológicos, el extracto etanólico total se sometió a partición con solventes de diferente polaridad (Acetato de etilo y Éter de petróleo), las cuales fuer...
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tesis de grado
Publicado 2023
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El uso de las plantas medicinales durante el desarrollo de la humanidad, ha sido una alternativa en el cuidado de la salud, todavía se desconoce o no se valora adecuadamente muchas especies; por ejemplo, las raíces y las partes aéreas de la Capsella bursa partoris L. Medick “chichicara” se han utilizado por medicina tradicional a nivel mundial para el tratamiento de múltiples dolencias, razón por la cual esta investigación tuvo como objetivo: estudio comparativo de la actividad antioxidante, Polifenoles totales, flavonoides, y minerales de los extractos etéreo, diclorometano y etanólico de la especie Capsella bursa pastoris “chichicara. Los extractos fueron obtenidos por maceración secuencial con diferentes solventes de polaridad y llevando a sequedad, se caracterizaron fisicoquímicamente, la determinación de la capacidad antioxidante por métodos DPPH, FRAP y CUPRAC, co...
7
tesis de maestría
Publicado 2024
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La proteína FhT es una cisteína proteasa con actividad fibrinolítica in vitro. La purificación de esta enzima de su organismo de origen resulta en cantidades limitadas y una baja pureza, además de ser un proceso costoso y laborioso. En esta investigación, empleamos tecnología de ADN recombinante para superar estas limitaciones. El objetivo fue producir la proteína FhT en su forma recombinante y evaluar su actividad fibrinolítica in vitro. Se clonó el gen de la forma zimógena de FhT (rProFhT) en el vector pPICZαC y se recombinó con el genoma de Pichia pastoris X-33. Se expresó rProFhT de 37 kDa y se purificó con un rendimiento de 20 mg/L. La activación de rProFhT a su forma enzimáticamente activa (rFhT) de 25 kDa se logró mediante la incubación con 10 mM de DTT y 1 mM de EDTA a pH 5 durante 8 horas. La enzima alcanzó su actividad óptima a un pH de 5 y mantenía activi...
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tesis de grado
Publicado 2021
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En el Perú es cada vez más frecuente que investigaciones realizadas en laboratorios de universidades públicas y privadas impliquen el uso de técnicas de biología molecular relacionadas con el clonamiento y expresión de genes en sistemas heterólogos con la finalidad de contribuir al conocimiento biomédico o industrial. El microorganismo de elección usado en la mayoría de estos casos es la bacteria Escherichia coli debido a la relativa sencillez tecnológica y procedimental, aunque sus alcances sean limitados en comparación con organismos más complejos que requieren un control más exacto de los parámetros fisicoquímicos y de suministro de los sustratos, como es el caso de la levadura Pichia pastoris o líneas celulares de mamíferos o insectos. Si bien existen biorreactores comerciales de alta eficacia y capaces de sustentar una diversidad de bioprocesos, su costo en la actu...
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tesis de grado
Publicado 2015
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El objetivo del estudio fue determinar la transmisión de anticuerpos maternos de cerdas inmunizadas con el antígeno Tsol18 expresado en la pichia pastoris (vacuna Tsol18 IIL) hacia sus lechones y la persistencia de estos anticuerpos contra la oncósfera de la Taenia solium. Para este trabajo se usaron 50 lechones que fueron divididos en 4 grupos. Los grupos 1, 2 y 3 con 11, 12 y 11 lechones que procedían de cerdas inmunizadas con dos dosis de la vacuna Tsol18 IIL a las 6 y 2 semanas antes del parto. El grupo 4 con 16 lechones que procedían de cerdas no inmunizadas. La inmunización de las crías fue con la misma vacuna que recibió la madre. El grupo 1 fue vacunado da los 8 y 12 semanas, el grupo 2 fue vacunado a los 12 y 16 semanas, el grupo 3 y grupo 4 fueron los controles. Las muestras de sangre fueron tomadas a las 2, 8, 12, 16 y 20 semanas de edad de la cual se obtuvieron los su...
10
tesis de maestría
Publicado 2020
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Las fosfolipasas A2 (PLA2) del veneno de las serpientes, son enzimas con una variedad de efectos biológicos, los cuales son atribuídos a sus diferentes isoformas ácidas y básicas. Algunas son: anticoagulantes, miotóxicas o neurotóxicas, siendo la miotoxicidad uno de los efectos más graves. Además, el clonamiento y expresión de una proteína recombinante es una herramienta importante para entender la estructura-función de una proteína, por ello, el objetivo de la presente investigación fue purificar, caracterizar y evaluar la actividad miotóxica de una isoforma nativa de PLA2 ácida (denominado BaPer-PLA2a) de B. atrox así como clonar y expresar su forma recombinante. Para ello, se purificó la proteína nativa en tres pasos cromatográficos usando DEAE-Sephadex-A50, Sephadex-G75 y un sistema cromatográfico automatizado líquido de presión media (MPLC). La enzima BaPerPLA2...
11
tesis de maestría
Publicado 2025
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El objetivo de la presente investigación es producir recombinante la Pictobina (rPictobina), como una alternativa en el marco ético de las 3R y de productividad, que permita continuar su evaluación biológica. La estrategia experimental incluyó la síntesis comercial del gen de la Pictobina, su amplificación e inserción en el vector pPICZα-C. Posteriormente, se realizó su propagación en Escherichia coli OneShot TOP10 y su expresión en el sistema eucariótico Pichia pastoris GS115. La proteína recombinante fue identificada y caracterizada funcionalmente mediante ensayos in vitro. La expresión de rPictobina se logró tras la inducción con metanol al 0.5% durante 7 días, obteniéndose un rendimiento de 0.4 mg/L. El análisis por SDS-PAGE reveló una masa molecular de 49 kDa. Además, rPictobina mostró actividad sobre el sustrato sintético BApNA y el tripéptido D-Val-Leu-Arg...
12
tesis de maestría
Publicado 2018
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El presente estudio tuvo como objetivo evaluar la aplicación de un programa educativo de salud bucal digital sobre las prácticas de higiene oral en escolares jóvenes de un CEBA del distrito de San Vicente, provincia de Cañete. La investigación es de tipo aplicada y el diseño experimental con el subtipo cuasi experimental. El programa fue desarrollado durante 3 meses y tuvo como muestra 108 alumnos del nivel avanzado, a quienes se les evaluó en conocimientos de salud bucal y nivel de destrezas prácticas de higiene oral antes y después de la aplicación del programa. El programa educativo de salud bucal digital ¨iDentss¨ utilizó recursos tecnológicos como estrategia de aprendizaje dirigida a jóvenes. Para medir los conocimientos se utilizaron cuestionarios validados por juicio de expertos, y para la destreza en higiene oral se utilizó el índice de placa simplificado de Gree...
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tesis de maestría
Publicado 2016
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Kids Club Afterschool es un servicio dirigido a niños de primaria (de seis a once años de edad) que estructura su tiempo combinando la realización de tareas acompañados de profesores especializados con el desarrollo de actividades lúdicas que complementarán su formación integral en un ambiente seguro y agradable. Los factores diferenciadores que caracterizan a Kids Club Afterschool son asesoría de tareas, variedad de actividades y horario flexible. Las dos primeras resuelven la problemática y el horario flexible aporta un valor extra al dar la facilidad a los padres de recoger a sus hijos cuando terminen de trabajar. La capacidad proyectada por local es de 186 niños, que para el caso del primer local representa la captación de un 5% de los usuarios potenciales. Para la apertura de nuevos locales se apuntará como máximo al 25% de los usuarios potenciales por ubicación. Para ...
