Analiza la obtención de la versión recombinante de ambas toxinas en la levadura Pichia pastoris por las ventajas que ofrece como las modificaciones postraduccionales y la formación de enlaces puentes disulfuro. El estudio inicia con la obtención del ARN (25 ± 55 ng/100 µ L)b la síntesis de ADN (1.6 a 4.8 ng ADN/ng ARN) y la posterior amplificación por PCR (reacción en cadena de polimerasa). Los amplicones fueron clonados en el vector pCR2.1cTOPO en células de Escherichia coli TOP10. La secuenciación confirma la obtención de Barnetobina y BaMtx junto con dos nuevas secuencias codificantes, BATXPLA3 (otra miotoxina de B. atrox) y BbtcSVSP2 (otra serinoproteinasa de B. barnetti). Se logra la subclonacion de Barnetobina y BaMtx en los vectores de expresión PICZac (que incluye una cola de polichistidina y un gen de resistencia al antibi7tico zeocina) y pPIC9 (con un gen de HIS4 c...

Las PLA2s homólogas (también conocidas como miotoxinas Lys49 o PLA2s K49) son las principales miotoxinas en los venenos de las serpientes del género Bothrops a pesar de presentar nula o ínfima actividad catalítica. En este trabajo, se identificaron tres nuevos transcritos codificantes de las PLA2s homólogas K49 en venenos de las especies Bothrops pictus (“jergón de la costa”), Bothrops brazili (“jergónshushupe”) y Bothrops atrox (“jergón de la selva”) que habitan en el Perú y se clonaron en células de Escherichia coli. Como primer paso, el RNA total fue aislado de venenos frescos y liofilizados, así como de tejido glandular. El rendimiento del RNA obtenido fue aproximadamente 5.0 ng/mg de veneno y 40.0 ng/mg de glándula. La cantidad y calidad de los transcritos fueron suficientes para la eficiente síntesis y amplificación del cDNA. La secuencia aminoacídica de...