Caracteriza una PLA2 miotóxica del veneno de la serpiente Bothrops pictus, evaluar su efecto sobre células de cáncer de mama y expresarla de manera recombinante en Pichia pastoris. Bothrops pictus es una serpiente endémica del Perú y una desencadenante de ofidismo. El efecto miotóxico de su veneno es conocido pero el componente principal que desencadena la miotoxicidad no ha sido descubierto. El trabajo reporta la purificación de una PLA2 básica miotóxica del veneno de B. pictus (BpMtx). La proteína es mostrada como dimérica en una PAGE-SDS y muestra una masa molecular de 13 740 Da (forma monomérica) mediante MALDI-TOF. BpMtx representa el 2.8% del veneno de B. pictus. BpMtx también muestra el efecto miotóxico (DMM: 8.951 ± 0.301 μg) y efecto edemático (DEM: 21.757±2.702 μg) en ensayos in vivo, así como actividad enzimática PLA2 (0.216 ± 0.035 U/mg). En cuanto a su ...

La serpiente Bothrops atrox, la mayor responsable de los accidentes ofídicos en el Perú, desencadena una fisiopatología por envenenamiento que se ve caracterizada en gran parte por la miotoxicidad. Por ello, en la presente tesis se ha aislado al componente responsable de la miotoxicidad del veneno de B. atrox para estudiar sus principales características biológicas e inmunológicas. La proteína fue purificada en un paso cromatográfico, empleando una resina CM-Sephadex C-25, mediante una gradiente de NaCl 0.6 M. El análisis por SDS-PAGE, mostró una sola banda de aproximadamente 13 kDa bajo condiciones reductoras, mientras que una banda ancha de 24 kDa fue observada bajo condiciones no reductoras. La proteína aislada mostró actividad enzimática de fosfolipasa A2, tanto para retardo de coagulación de yema de huevo como para el ensayo espectrofotométrico de fosfatidilcolina. En...

Introducción: La expresión recombinante de toxinas de origen ofídico ha permitido potenciar su estudio tanto estructural y funcional, especialmente en sus aplicaciones biomédicas. Pictobina es una enzima similar a trombina del veneno de B. pictus, especie endémica del Perú, que presenta un alto potencial. Objetivo: producir la versión recombinante de Pictobina (rPictobina) en el modelo eucariótico Piccha pastoris, Métodos: Se inició con las síntesis comerciales de la secuencia nucleotídica de Pictobina (750 pb), que incorpora los sitios de restricción EcoR I y Not I. Esta secuencia fue amplificada por PCR, insertada en el vector pPICZα-C y clonada en E. coli OneShot TOP10. Posteriormente, se amplificó el plásmido pPICZα-C–rPictobina para su transformación y expresión en el sistema Pichia pastoris GS115. Resultados: La expresión se logró tras la inducción con metan...