Fasciola hepatica produce, durante la infección, una serie de cisteínas tipo catepsina L la cual permiten al parásito la invasión, alimentación y evasión del sistema inmune. El tremátodo expresa 7 isoformas de Catepsina tipo L, siendo catepsina L5 (CatL5Fh) secretada en mayor proporción en el estadio adulto; por lo que se considera que esta proteinasa está involucrada en la supervivencia y alimentación ya que puede degradar componentes proteicos del hospedero definitivo. En la Unidad de Biotecnología Molecular (UBM) se ha determinado que CatL5Fh puede degradar ST3 (codificado en UBM) por lo cual resulta de interés evaluar esta cisteina proteinasa como un potencial agente de aplicación biomédico. Debido a que la purificación de CatL5Fh nativa a partir de parásitos adultos requiere de inversión de costo y tiempo resultando en bajos rendimientos de la proteinasa pura; el ob...

La proteína FhT es una cisteína proteasa con actividad fibrinolítica in vitro. La purificación de esta enzima de su organismo de origen resulta en cantidades limitadas y una baja pureza, además de ser un proceso costoso y laborioso. En esta investigación, empleamos tecnología de ADN recombinante para superar estas limitaciones. El objetivo fue producir la proteína FhT en su forma recombinante y evaluar su actividad fibrinolítica in vitro. Se clonó el gen de la forma zimógena de FhT (rProFhT) en el vector pPICZαC y se recombinó con el genoma de Pichia pastoris X-33. Se expresó rProFhT de 37 kDa y se purificó con un rendimiento de 20 mg/L. La activación de rProFhT a su forma enzimáticamente activa (rFhT) de 25 kDa se logró mediante la incubación con 10 mM de DTT y 1 mM de EDTA a pH 5 durante 8 horas. La enzima alcanzó su actividad óptima a un pH de 5 y mantenía activi...