Efecto del silenciamiento de los genes que codifican a bombas de eflujo (Rv3756C, Rv1667C y Rv3008) en el eflujo de ácido pirazinoico y en la susceptibilidad a pirazinamida en Mycobacterium tuberculosis

• Autor: Aricoche Del Campo, Kiara Beatriz
• Formato: tesis de grado
• Fecha de Publicación: 2025
• Institución: Universidad Peruana Cayetano Heredia
• Repositorio: UPCH-Institucional
• Lenguaje: español
• OAI Identifier: oai:repositorio.upch.edu.pe:20.500.12866/17028
• Enlace del recurso: https://hdl.handle.net/20.500.12866/17028
• Nivel de acceso: acceso abierto
• Materia: Mycobacterium Tuberculosis; Resistencia; Pirazinamida; Crispri; http://purl.org/pe-repo/ocde/ford#1.06.01; http://purl.org/pe-repo/ocde/ford#3.03.08

Mycobacterium tuberculosis es el agente causante de la tuberculosis, enfermedad que provocó 1,8 millones de muertes en el 2023. La pirazinamida es un fármaco esencial que permite acortar el tratamiento de la tuberculosis a seis meses. Sin embargo, el aumento de cepas resistentes representa una amenaza para el control de la enfermedad. El principal mecanismo de resistencia a pirazinamida se atribuye a mutaciones en el gen pncA, que codifica la enzima pirazinamidasa, encargada de convertir pirazinamida en su forma activa, el ácido pirazinoico (POA).Estudios recientes han sugerido que la velocidad de eflujo de POA también influye en la resistencia a pirazinamida. Se ha demostrado que la sobreexpresión de genes que codifican bombas de eflujo, como Rv0191, Rv3756c, Rv3008 y Rv1667c, puede generar resistencia. Además, una mutación puntual (S292L) en la bomba Rv1258c incrementa el eflujo de POA y la resistencia a pirazinamida, efecto que puede revertirse mediante inhibidores como la piperina. Este estudio evaluó el efecto del silenciamiento transcripcional individual de los genes Rv3756c, Rv3008 y Rv1667c mediante CRISPRi en M. tuberculosis. Se analizó la velocidad de eflujo de POA utilizando la técnica de Wayne y la susceptibilidad a PZA mediante el ensayo “Tetrazolium Microplate Assay” (TEMA). Los resultados mostraron una reducción significativa en los niveles de expresión de Rv3756c y Rv1667c, aunque sin cambios en la velocidad de eflujo de POA ni en la susceptibilidad a pirazinamida, lo que sugiere la posible existencia de mecanismos compensatorios o redundantes en el sistema de eflujo.