Represión transcripcional por CRISPRi de genes homólogos de bombas de eflujo de Mycobacterium tuberculosis en el modelo de Mycobacterium smegmatis y su efecto en el eflujo del ácido pirazinoico

• Autor: Quiñones Garcia, Maura Stefany
• Formato: tesis de maestría
• Fecha de Publicación: 2021
• Institución: Universidad Peruana Cayetano Heredia
• Repositorio: UPCH-Institucional
• Lenguaje: español
• OAI Identifier: oai:repositorio.upch.edu.pe:20.500.12866/10037
• Enlace del recurso: https://hdl.handle.net/20.500.12866/10037
• Nivel de acceso: acceso abierto
• Materia: Bombas de Eflujo; M. smegmatis; M. tuberculosis; Ácido Pirazinoico; https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#1.06.01; https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#3.01.05; https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#3.02.07; https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#3.03.08

La tuberculosis (TB) es una enfermedad infecciosa causada por la bacteria Mycobacterium tuberculosis. El tratamiento recomendado para combatir la TB en adultos se basa en el uso de drogas de primera línea, como la pirazinamida (PZA). La PZA es usada también en el tratamiento de TB multidrogo resistente (MDR-TB) debido a que su función principal es la erradicación de cepas en estado de latencia. En la actualidad aún no se conoce del todo el mecanismo de acción de la forma activa de la PZA, el ácido pirazinoico (POA). La principal causa de resistencia a PZA son las mutaciones en el gen pncA; gen que codifica a la pirazinamidasa y convierte la PZA en POA; sin embargo, existen cepas resistentes a PZA que son independientes de esta condición, por lo que se cree que existen otros mecanismos que pueden explicar la resistencia como mutaciones en las bombas de eflujo. El objetivo del estudio fue silenciar mediante CRISPR de interferencia a genes que codifican a bombas de eflujo relacionadas al eflujo de ácidos débiles y evaluar la velocidad del eflujo del POA en M. smegmatis mediante la prueba de Wayne cuantitativo. Se seleccionaron genes que codifican a las proteínas relacionadas con la función de bombas de eflujo homólogas en M. tuberculosis. Los genes fueron silenciados en forma simple (MSMEG_0250, MSMEG_3815, MSMEG_0241, MSMEG_5046 y MSMEG_0410) y en combinación de 2 (MSMEG_3815/ MSMEG_0410, MSMEG_3815/ MSMEG_0250 y MSMEG_3815/ MSMEG_0241). El silenciamiento del gen MSMEG_0250 fue el único que cambió la velocidad del eflujo del POA significativamente (P=0.0006).