Purificación parcial y determinación de los parámetros cinéticos y termodinámicos de la fosfatasa ácida extraída a partir de semillas de quinua negra (Chenopodium quinoa Willd)

• Autor: Cuentas Caceres, Edson Jose
• Formato: tesis de grado
• Fecha de Publicación: 2024
• Institución: Universidad Nacional de San Agustín
• Repositorio: UNSA-Institucional
• Lenguaje: español
• OAI Identifier: oai:repositorio.unsa.edu.pe:20.500.12773/18598
• Enlace del recurso: https://hdl.handle.net/20.500.12773/18598
• Nivel de acceso: acceso abierto
• Materia: Fosfatasa ácida; C. quinoa; purificación; https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#1.06.16

La fosfatasa ácida es una enzima clave en la regulación de la adquisición de fosfato en diversas especies vegetales. En este trabajo, nos enfocamos en la purificación parcial y caracterización de la fosfatasa ácida a partir de semillas de quinua negra (Chenopodium quinoa Willd), conocida localmente en el sur del Perú como "ara", determinando su actividad específica, propiedades cinéticas y termodinámicas, estabilidad en diferentes condiciones utilizando técnicas de purificación estándar, precipitación con sulfato de amonio al 90% y cromatografía en Sephadex G-75. Se logró una purificación con un factor de 43.3 veces, una actividad específica de 50.12 U/mg y un rendimiento del 4.2%. La fosfatasa ácida se aisló como una proteína de 82.72 kDa. La enzima mostró una actividad óptima a 55°C y pH 6. Se obtuvo una energía de activación de 24.98 kJ/mol, con un Km de 0.17 mM y una Vmax de 0.022 μM/min. Además, los ensayos del efecto del pH sobre Km y Vmax indican la participación de dos grupos ionizables en el complejo enzima-sustrato, el grupo carboxilo del ácido glutámico y el grupo imidazol del aminoácido histidina. Los parámetros termodinámicos; cambio de entalpía (ΔH), cambio de energía libre de Gibbs (ΔG) y cambio en entropía (ΔS) fueron calculados 22.63 kJmol-1, 81.46 kJmol-1 y -0.1820 kJmol-1 respectivamente, confirmando que la reacción enzimática es endotérmica, no es espontánea y presenta un fenómeno de agregación al aumentar la temperatura.