Expresión de Defensinas en Yeyuno de Crías de Alpacas (Vicugna pacos) con Enteropatías

• Autores: Siuce M., Juan, Manchego S., Alberto, Sandoval C., Nieves, More B., Juan, Chiok C., Kim-Lam, Pezo C., Danilo, Rivera G, Hermelinda
• Formato: artículo
• Fecha de Publicación: 2015
• Institución: Universidad Nacional Mayor de San Marcos
• Repositorio: Revista UNMSM - Revista de Investigaciones Veterinarias del Perú
• Lenguaje: español
• OAI Identifier: oai:ojs.csi.unmsm:article/11093
• Enlace del recurso: https://revistasinvestigacion.unmsm.edu.pe/index.php/veterinaria/article/view/11093
• Nivel de acceso: acceso abierto
• Materia: alpacas; antimicrobial peptides; defensins; PCR; real-time RT-PCR; péptidos antimicrobianos; defensinas; RT-PCR tiempo real

El objetivo del presente estudio fue determinar la expresión de péptidos antimicrobianos (á- y â-defensinas) en el epitelio intestinal de crías de alpaca de 1 a 6 semanas de edad y con enteropatías, mediante la cuantificación relativa de ARN mensajeros (ARNm) de las á (defa 8) y â (â def alp) defensinas. Se tomaron dos porciones de yeyuno de 2 cm de longitud de 29 crías de alpacas con signos de diarrea. Una porción se procesó para el análisis histopatológico utilizando la tinción Hematoxilina-Eosina para determinar el tipo de enteropatía. De la otra porción se obtuvo el ARNm total de los raspados yeyunales, que sirvió de molde para la síntesis de cDNA mediante transcripción reversa (RT), seguido de un PCR en Tiempo Real, para la amplificación y detección de las defensinas. La cuantificación relativa de ARNm se realizó mediante el método 2- ÄÄCt. Las crías enfermas mostraron una expresión de á-defensina (Defa 8) correspondiente a 18.15 veces lo expresado por el animal recién nacido o calibrador. La expresión de la â-defensina (â-defalp) correspondió a 258.29 veces lo expresado por el calibrador, y con diferencia significativa (p<0.05), tanto en Defa 8 yâ-defalp, al compararlos con un grupo de crías de alpacas sanas criadas en similares condiciones de un estudio previo. Los resultados demuestran que las á- y â-defensinas entéricas son inducidas de manera significativa durante cuadros entéricos en las alpacas.
The aim of this study was to determine the expression of antimicrobial peptides (α- and β-defensins) in the intestinal epithelium of newborn alpaca (1 to 6 weeks of age) with enteropathies, using the relative quantification of messenger RNA (mRNA) of the α (Defa 8) and β (β def alp) defensins. Two portions of the jejunum (2 cm) were collected from 29 newborn alpaca with signs of diarrhea. One portion was processed for histological analysis using hematoxylin-eosin staining to determine the type of enteropathy. The second portion was used to obtain total mRNA from jejunal scrapings, which served as template for cDNA synthesis by reverse transcription (RT), followed by a Real-Time PCR for the amplification and detection of defensins. The relative quantification of mRNA was performed using 2-ΔΔCt method. The sick newborn showed an expression of α-defensin (Defa 8) corresponding to 18.15 times as expressed by the newborn animal or calibrator and the expression ofβ-defensin (β-def alp) corresponded to 258.29 times as expressed by the calibrator. Statistical difference was found (p<0.05) in both Defa 8 and β-defalp expression of sick newborn when compared with a group of young healthy alpacas raised in similar conditions in a previous study. The results showed that α- and β-enteric defensins are induced significantly during enteric diseases in alpacas.