CINÉTICA DE EXPRESIÓN DE INMUNOGLOBULINA A EN EL EPITELIO INTESTINAL DE CRÍAS DE ALPACA (Vicugna pacos).

• Autores: Dionisio C., Juan, Manchego S., Alberto, Chiok C., Kim Lam, Sandoval C., Nieves, More B., Juan, Pezo C., Danilo, Rivera G., Hermelinda
• Formato: artículo
• Fecha de Publicación: 2014
• Institución: Universidad Nacional Mayor de San Marcos
• Repositorio: Revista UNMSM - Revista de Investigaciones Veterinarias del Perú
• Lenguaje: español
• OAI Identifier: oai:ojs.csi.unmsm:article/8486
• Enlace del recurso: https://revistasinvestigacion.unmsm.edu.pe/index.php/veterinaria/article/view/8486
• Nivel de acceso: acceso abierto
• Materia: South American camelids; intestinal mucosal immunity; immunoglobulin A; PCR; RT-PCR; relative quantification; Camélidos sudamericanos; inmunidad de mucosa intestinal; inmunoglobulina A; RT-PCR tiempo real; cuantificación relativa.

El presente estudio tuvo como objetivo determinar y comparar los niveles de expresión relativa de ARN mensajero (ARNm) de IgA en el epitelio intestinal de las crías de alpacas en aparente buen estado de salud (n=35) o enfermas con enteropatía (n=35). Encada grupo se incluyeron cinco animales recién nacidos antes del consumo de calostro y cinco por cada semana de edad hasta la sexta semana. Se tomaron 2 cm de yeyuno por animal y se almacenaron en congelación a -196 °C. Se realizó la extracción de ARN total con Trizol® y luego se sintetizó el ADN complementario (ADNc). Posteriormente se realizó el PCR y la RT-PCR Tiempo Real empleando oligonucleótidos diseñados para la detección del exón 1 de la región Fc IgA de alpaca. Se realizó la cuantificación de la expresión relativa mediante normalización con ARNm del gen GAPDH y los cálculos de la expresión relativa se realizaron utilizando el método 2-Ct. Se identificó y demostró mediante la técnica de RT-PCR tiempo real que las alpacas codifican y transcriben ARNm del exón 1 de la región Fc de IgA desde el primer día de edad, mas no al nacimiento; siendo su expresión relativa detectada y producida en la mucosa intestinal de crías de alpacas a partir de un día de edad, tanto en animales sanos como enfermos. Los animales sanos presentaron una tendencia de expresión constante de ARNm de IgA hasta la cuarta semana de edad, con disminución discreta en las semanas subsiguientes, mientras que la producción de ARNm de IgA en los cuadros entéricos fue siempre superior a lo expresado por los animales sanos. Se encontraron diferencias significativas (p<0.05) entre grupos (sanos 38.8 y enfermos 113 veces, respectivamente, respecto del calibrador).
The objective of the present study was to determine and compare the levels of the relative expression of messenger RNA (mRNA) of IgA in intestinal epithelium of newborn alpaca up to 45 days old, that were in good health status (n=35) and ill with enteropathy (n=35). In each group, five animals were newborns before the consumption of colostrum and five for each week of age until the sixth week. Samples consisted in 2 cm length of jejunum, which was immediately preserved at -196 °C. The extraction was done with Trizol®, then complementary DNA (cDNA) was synthesized. Subsequently, the conventional PCR and real time RT-PCR was conducted using oligonucleotides designed for detecting the exon 1 of the Fc IgA region of alpaca. The quantification of the relative expression was made through normalization with the GAPDH gene mRNA and the relative expression calculations were conducted using the 2-ΔΔCt method. It was identified and demonstrated through the real time RT-PCR technique that alpacas encoded and transcribed mRNA of exon 1 of the IgA Fc region from the first day of age, but not at birth. Also, the relative expression is detected and produced in intestinal epithelium of newborn alpaca from one day of age, both in healthy and ill animals. Healthy animals have atendency of constant expression of mRNA of IgA until the fourth week of age, with slightly decrease in the subsequent weeks, whereas in enteric diseases IgA mRNA production is always superior than the expressed by the healthy animals, having significant differences (p<0.05) between the two groups (healthy 38.8 and sick 113 times respectively, with regard to the calibrator).