Desarrollo de una técnica de PCR Development of a PCR technique for the detection of Fowl adenovirus 4 (FADV-4) in tissue samples

• Autores: Chávez-Montenegro, Víctor, Longa-Bobadilla, Vladimir, Ormeño-Vásquez, Phillip, Tataje Lavanda, Luis, Fernández Díaz, Manolo
• Formato: artículo
• Fecha de Publicación: 2021
• Institución: Universidad Nacional Mayor de San Marcos
• Repositorio: Revista UNMSM - Revista de Investigaciones Veterinarias del Perú
• Lenguaje: español
• OAI Identifier: oai:ojs.csi.unmsm:article/18110
• Enlace del recurso: https://revistasinvestigacion.unmsm.edu.pe/index.php/veterinaria/article/view/18110
• Nivel de acceso: acceso abierto
• Materia: FAdV-4; PCR; primers; standardization; sensitivity; specificity; cebadores; estandarización; sensibilidad; especificidad

            It is important to have a PCR technique capable of detecting avian adenovirus 4 with high sensitivity and precision in cell cultures and samples of avian origin. In the present work, a PCR technique was standardized. First, the Internal Reference Material (IRM) was prepared, using cell culture in EB66 cells, infected with FAdV-4; then the virus was purified, the DNA was extracted and the amplicon was quantified. Finally, the temperature gradient test, primer concentration test, sensitivity test and specificity test were carried out using the Q5® High-Fidelity 2X Master PCR kit. Of the five primers used, the HHS*-3 and HHS*-4 primers passed all the tests, with HHS*-3 being the most sensitive as it detected up to 1 pg/µl.
            Es importante contar con una técnica de PCR capaz de detectar adenovirus aviar 4 con una alta sensibilidad y precisión en cultivos celulares y muestras de origen aviar. En el presente trabajo se estandarizó una técnica de PCR. Primero se procedió a la preparación del Material de Referencia Interna (M.R.I.), usando el cultivo celular en células EB66, infectado FAdV-4; luego se purificó el virus, se extrajo el ADN y se cuantificó el amplicón. Finalmente se procedió a realizar la prueba de la gradiente de temperatura, prueba de concentración de cebadores, prueba de sensibilidad y prueba de especificidad utilizando el kit de PCR Q5® High-Fidelity 2X Master. De los cinco cebadores utilizados, los cebadores HHS*-3 y HHS*-4 pasaron todas las pruebas, siendo HHS*-3 el más sensible ya que detectó hasta 1 pg/µl.