Evaluación de un método de detección de Escherichia coli enterotoxigénica (ETEC) utilizando Chelex – 100 en muestras de heces colectadas en papel filtro

• Autor: Llican Mendoza, Maria Alejandra
• Formato: tesis de grado
• Fecha de Publicación: 2024
• Institución: Universidad Peruana Cayetano Heredia
• Repositorio: UPCH-Institucional
• Lenguaje: español
• OAI Identifier: oai:repositorio.upch.edu.pe:20.500.12866/16156
• Enlace del recurso: https://hdl.handle.net/20.500.12866/16156
• Nivel de acceso: acceso abierto
• Materia: Escherichia Coli; Diarrea; Papel Filtro; Chelex-100; http://purl.org/pe-repo/ocde/ford#1.06.00

La enfermedad diarreica es una de las causas principales de muerte en niños menores de cinco años. Uno de los patógenos involucrados en esta enfermedad especialmente en países de mediano y bajo ingreso es la Escherichia coli Enterotoxigénica (ETEC). En los estudios realizados que implican el uso de muestras fecales para el diagnóstico, existen dificultades en la colecta, transporte y almacenamiento; una alternativa planteada para superar estos problemas es el uso del papel filtro, que permite el almacenamiento de muestras a temperatura ambiente y ocupa menor espacio. Asimismo, existe un amplio número de métodos de extracción de ADN muchos de los cuales están basados en kits que no se ajustan económicamente a las necesidades de los lugares donde la enfermedad diarreica es prevalente. De esta forma, este estudio busca evaluar conjuntamente el uso de muestras de heces en papel filtro y la extracción de su ADN utilizando Chelex – 100 para detectar Escherichia coli enterotoxigénica (ETEC) mediante Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) convencional múltiple. El límite de detección del método propuesto fue 5.8x104 UFC/g. El ensayo de interferencia para determinar especificidad analítica para detectar ETEC y el análisis de los cebadores utilizados mostraron que el método es específico. En el ensayo de precisión se obtuvo un 100% para 3 de los 4 puntos de las diluciones escogidas y se obtuvo un 80% para uno de los puntos mostrado una buena precisión del método. El método propuesto obtuvo en 100% de exactitud al compararlo con la extracción con kit Qiagen a partir de muestras frescas. La detección de ETEC utilizando Chelex-100 y muestras de heces en papel filtro mostró una concordancia de moderada a fuerte (k=0.794) con la detección de ETEC utilizando un kit comercial y muestras de heces frescas. (AU)