Obtención de determinantes genéticos y producción de Microcina J25 (MccJ25) en laboratorio

• Autor: Dumet Delgado, Rafael Abdel David
• Formato: tesis de grado
• Fecha de Publicación: 2020
• Institución: Universidad Peruana Cayetano Heredia
• Repositorio: UPCH-Institucional
• Lenguaje: español
• OAI Identifier: oai:repositorio.upch.edu.pe:20.500.12866/10005
• Enlace del recurso: https://hdl.handle.net/20.500.12866/10005
• Nivel de acceso: acceso abierto
• Materia: Clonación; Detección; Microcina; PCR; E. coli; Antibiótico; https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#1.06.01; https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#1.06.03; https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#3.01.05

En la actualidad, se ha visto un auge de bacterias patógenas resistentes a antibióticos. La aparición de bacterias resistentes a antibióticos no solo de uso regular, pero también resistentes a antibióticos de última línea presenta una seria preocupación de salud a nivel global. Debido a esto, han aumentado los esfuerzos para obtener nuevos compuestos antibióticos. Compuestos ya encontrados en el medio ambiente tienden a ser mejores blancos de estudio, debido a su fácil obtención en comparación con la síntesis de compuestos nuevos. En el presente trabajo se intentó gene rar una bacteria que produjera microcina J25 (MccJ25) en el laboratorio para futuros estudios. Se realizó el cribado de 126 aislados de E. coli patogénicas en búsqueda de los determinantes genéticos de microcina J25 (MccJ25) mediante colony PCR. No se encontraron bacterias que arrojaran un diagnóstico positivo en este ensayo, por lo que se diseñó un plásmido, pKM1, con los cuatro genes responsables de la producción de MccJ25 con base en la secuencia reportada por los descubridores originales, Salomón y Farías, en el año 1996. E. coli NEB® Stable transformadas con pKM1 no produjeron el antibiótico en las condiciones de cultivo esperadas. El análisis de la secuencia reportada en 1996 indicó la presencia de una mutación sin sentido que produce la interrupción de la traducción del gen mcjC. E. coli NEB® Stable fue transformada con el plásmido corregido por mutagénesis dirigida mediada por PCR, pKM2, y se procedió a los ensayos antibióticos. Estas bacterias fueron capaces de producir MccJ25 tras 24 horas de cultivo en medio LB sin necesidad de inductor, como se había previsto. Esto muestra la viabilidad del plásmido pKM2 como plásmido productor de MccJ25.