Clonación, expresión y evaluación inmunológica de la proteína Omp31 de Brucella melitensis y evaluación de su posible uso para el diagnóstico en brucelosis bovina

• Autores: Rosales Rangel, Jose David, Castillo Ochoa, Annie, Reyna Bello, Armando, Serrano, Ana Teresa, Fernandez Gomez, Rodolfo
• Formato: artículo
• Fecha de Publicación: 2018
• Institución: Universidad Nacional Mayor de San Marcos
• Repositorio: Revista UNMSM - Revista de Investigaciones Veterinarias del Perú
• Lenguaje: español
• OAI Identifier: oai:ojs.csi.unmsm:article/14008
• Enlace del recurso: https://revistasinvestigacion.unmsm.edu.pe/index.php/veterinaria/article/view/14008
• Nivel de acceso: acceso abierto
• Materia: brucellosis; Omp31r; recombinant protein; brucelosis; proteína recombinante

El diagnóstico serológico de la brucelosis se lleva a cabo por la detección de anticuerpos generados contra el liposacárido “LPS” o extractos bacterianos de células enteras por ELISA o pruebas de aglutinación. El objetivo del trabajo fue evaluar una proteína recombinante que pueda ser usada en el diagnóstico serológico de la brucelosis bovina. Se escogió el gen de la Omp31 de Brucella melitensis 16M. El gen fue clonado a partir de ADN de B. melitensis. La expresión de la proteína Omp31r se realizó en un sistema de expresión procariota utilizando el vector pET28a y la purificación por cromatografía de afinidad a metales (IMAC). Un ELISA indirecto fue estandarizado utilizando sueros controles de bovinos positivos y negativos. La proteína Omp31r reaccionó con los sueros controles positivos y logró discriminarlos frente a los sueros negativos. La sensibilidad y especificidad del ensayo de ELISA fue de 77.2% y de 90.6%, respectivamente. Este sistema de ELISA indirecto puede ser útil para los diagnósticos rápidos de grandes números de muestras en el diagnóstico de la brucelosis bovina.
The serological diagnosis of brucellosis is carried out by the detection of antibodies generated against the liposaccharide «LPS» or bacterial extracts of whole cells by ELISA or agglutination tests. The objective of this study was to evaluate a recombinant protein that can be used in the serological diagnosis of bovine brucellosis. The Omp31 gene of Brucella melitensis 16M was chosen. The gene was cloned from DNA of B. melitensis; the expression of the Omp31r protein was performed in a prokaryotic expression system using the pET28a vector and purification by metal affinity chromatography (IMAC). An indirect ELISA was standardized using control sera from positive and negative bovines. The Omp31r protein reacted with the positive control sera and succeeded in discriminating against the negative sera. The sensitivity and specificity of the ELISA assay was 77.2% and 90.6%, respectively. This indirect ELISA system can be useful for the rapid diagnosis of large numbers of samples in the diagnosis of bovine brucellosis.