Identificación de una nueva serina proteasa del veneno de la serpiente peruana Bothrops pictus, Jergón de la costa (Serpentes: Viperidae)

• Autor: Rivas Amado, Raul
• Formato: tesis de grado
• Fecha de Publicación: 2024
• Institución: Universidad Nacional Mayor de San Marcos
• Repositorio: UNMSM-Tesis
• Lenguaje: español
• OAI Identifier: oai:cybertesis.unmsm.edu.pe:20.500.12672/23774
• Enlace del recurso: https://hdl.handle.net/20.500.12672/23774
• Nivel de acceso: acceso abierto
• Materia: Serina proteasa; Bioquímica; Bothrops; Venenos de Víboras; https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#1.06.03

Bothrops pictus, es una serpiente endémica del Perú que habita los valles de la costa central entre los departamentos de Arequipa y La Libertad. De su veneno, se ha caracterizado previamente una serina proteasa denominada Pictobina, cuyo uso farmacológico actualmente, se encuentra en estudio. La importancia de las serina proteasas estriba en su potencial uso como antitrombótico para reducir los riesgos circulatorios y los daños cardíacos, así como su acción migrastática y alteración mitocondrial de células tumorales. En el presente trabajo, se ha aislado y caracterizado una nueva serina proteasa denominada Bp-SP2. La purificación constó de un primer paso cromatográfico de intercambio catiónico (CM Sephadex C-50), seguida por dos pasos cromatográficos de filtración molecular en Sephadex G-100 y Sephadex G-50 respectivamente. La enzima fue purificada 51.95 veces con un rendimiento del 20.8 %; el análisis por PAGE - SDS mostró una banda única de 33 kDa en condiciones reductoras (2 β-mercaptoetanol) y de 26 kDa en condiciones no reductoras, por lo que se infiere que la enzima es monocatenaria con puentes disulfuro intracatenarios. La Bp-SP2 no presenta actividad coagulante sobre fibrinógeno bovino. La actividad amidolítica con respecto a la temperatura se mantuvo por encima del 50% entre los 25 °C y 60 °C; 6.0 a 8.5 para valores de pH siendo 7.5 el pH óptimo, y no fue alterada significativamente por los iones Mg+2, Na+, Ca+2 y Mn+2. La proteína hidrolizó el sustrato cromogénico BApNA y a los tripéptidos sintéticos cromogénicos comerciales: S-2266 (sustrato para calicreína glandular), S-2160 (sustrato para trombina) y S-2222 (sustrato para el factor Xa); el tripéptido D-Phe-Val-Arg-pNa (S-2160) fue considerado como el mejor sustrato. Finalmente, la actividad amidolítica fue inhibida por el DTT y el PMSF, este último confirma la presencia de la serina como el residuo principal del sitio activo. Se concluye que se ha identificado una segunda serina proteasa en el veneno de la serpiente B. pictus (Bp-SP2), siendo materia base para otros estudios moleculares, biológicos y/o farmacológicos.