PCR en tiempo real y análisis de fusión de alta resolución de amplicones obtenidos de cebadores dirigidos al minicírculo del kinetoplasto para la detección de Leishmania

• Autor: Montoya Alvarado, Julio Jairzinho
• Formato: tesis de grado
• Fecha de Publicación: 2023
• Institución: Universidad Nacional Mayor de San Marcos
• Repositorio: UNMSM-Tesis
• Lenguaje: español
• OAI Identifier: oai:cybertesis.unmsm.edu.pe:20.500.12672/20687
• Enlace del recurso: https://hdl.handle.net/20.500.12672/20687
• Nivel de acceso: acceso abierto
• Materia: Leishmania; Tecnología médica; https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#3.03.06; https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#3.03.07; https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#3.04.03

Evalúa el desempeño de la reacción en cadena de la polimerasa a tiempo real y análisis de fusión alta resolución de amplicones obtenidos de cebadores dirigidos al minicírculo del kinetoplasto para la detección de Leishmania. El presente estudio es cuantitativo, descriptivo y transversal no experimental. Se usó 9 cultivos almacenados (C1 a C9) de Leishmania, cuyo comportamiento de crecimiento fue evaluado in vitro. Para la PCR en tiempo real y análisis de fusión de alta resolución (PCR HRM), se seleccionaron cebadores empleados en la bibliografía. Con el ADN obtenido de los cultivos, se realizó la PCR HRM y se analizó las temperaturas de fusión halladas, además, se determinó el límite de detección mediante diluciones seriadas. Los recuentos parasitarios de los cultivos C1 al C5 obtuvieron de 30 a 100 millones de parásitos por mL al inicio de la fase estacionaria, y los cultivos C6 al C9 alcanzaron recuentos cercanos al inóculo inicial de 500 parásitos por mL. Se concluye que los cebadores seleccionados determinaron el género y subgénero de los 9 cultivos de Leishmania; los cebadores PASSOS F-PASSOS R a través de la PCR HRM determinaron en los cultivos utilizados los dos subgéneros L. Leishmania y L. Viannia con Tm diferentes entre estos dos grupos. Los cebadores MP1L-MP3H determinaron el subgénero L. Viannia en los cultivos C6 al C9 sin diferencias en sus Tm; y los cebadores PASSOS F-MP3H que amplificaron los cultivos C6 al C9 no hallaron diferencias concluyentes en sus Tm.