PCR en tiempo real y análisis de fusión de alta resolución de amplicones obtenidos de cebadores dirigidos al minicírculo del kinetoplasto para la detección de Leishmania - Montoya Alvarado, Julio Jairzinho (2023)
Evalúa el desempeño de la reacción en cadena de la polimerasa a tiempo real y análisis de fusión alta resolución de amplicones obtenidos de cebadores dirigidos al minicírculo del kinetoplasto para la detección de Leishmania. El presente estudio es cuantitativo, descriptivo y transversal no experimental. Se usó 9 cultivos almacenados (C1 a C9) de Leishmania, cuyo comportamiento de crecimiento fue evaluado in vitro. Para la PCR en tiempo real y análisis de fusión de alta resolución (PCR HRM), se seleccionaron cebadores empleados en la bibliografía. Con el ADN obtenido de los cultivos, se realizó la PCR HRM y se analizó las temperaturas de fusión halladas, además, se determinó el límite de detección mediante diluciones seriadas. Los recuentos parasitarios de los cultivos C1 al C5 obtuvieron de 30 a 100 millones de parásitos por mL al inicio de la fase estacionaria, y los cultivos C6 al C9 alcanzaron recuentos cercanos al inóculo inicial de 500 parásitos por mL. Se concluye que los cebadores seleccionados determinaron el género y subgénero de los 9 cultivos de Leishmania; los cebadores PASSOS F-PASSOS R a través de la PCR HRM determinaron en los cultivos utilizados los dos subgéneros L. Leishmania y L. Viannia con Tm diferentes entre estos dos grupos. Los cebadores MP1L-MP3H determinaron el subgénero L. Viannia en los cultivos C6 al C9 sin diferencias en sus Tm; y los cebadores PASSOS F-MP3H que amplificaron los cultivos C6 al C9 no hallaron diferencias concluyentes en sus Tm.