Aislamiento y selección de bacterias productoras de Lipasas nativas altamente selectivas sobre triglicéridos

Descripción del Articulo

Universidad Nacional Agraria La Molina. Facultad de Ciencias. Departamento Académico de Biología
Detalles Bibliográficos
Autor: Huarcaya Calderón, Margaret Melissa
Formato: tesis de grado
Fecha de Publicación:2024
Institución:Universidad Nacional Agraria La Molina
Repositorio:UNALM-Institucional
Lenguaje:español
OAI Identifier:oai:repositorio.lamolina.edu.pe:20.500.12996/6897
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spelling Ludeña Hinojosa, YvetteVillena Chávez, Gretty Katherinab17fa3b8-00be-4438-91d8-0685262298c4-1Huarcaya Calderón, Margaret Melissa2025-01-22T19:18:57Z2025-01-22T19:18:57Z2024https://hdl.handle.net/20.500.12996/6897Universidad Nacional Agraria La Molina. Facultad de Ciencias. Departamento Académico de BiologíaEl enriquecimiento de ácidos grasos poliinsaturados, especialmente los ω-3, es una estrategia clave para mejorar el valor nutricional de aceites para consumo humano. Entre los métodos utilizados, la hidrólisis enzimática con lipasas ha despertado un gran interés en la industria aceitera. No obstante, la escasez de lipasas comerciales eficientes ha impulsado la búsqueda de nuevas enzimas, preferentemente de origen microbiano. En este estudio, se aislaron bacterias del intestino de pescado y se tamizaron utilizando sustratos ésteres naturales y sintéticos. Se preseleccionaron 10 cepas con actividad lipolítica, identificadas mediante la secuenciación del gen ARNr 16S, predominando el género Staphylococcus. De estas cepas, LMB-06 (S. urealyticus), LMB-Ju02 (S. urealyticus), LMB-JH06 (S. epidermidis) y LMBJH07 (S. warneri) mostraron alta actividad lipolítica en el tamizado cuantitativo. LMB-06 y LMB-Ju02 fueron seleccionadas para la producción de extractos lipolíticos debido a su mayor actividad en medios ricos en nitrógeno. Los extractos crudos con lipasas fueron parcialmente caracterizados, determinándose un pH óptimo de 7 y temperaturas óptimas de 30°C y 37°C para LMB-06 y LMB-Ju02, respectivamente. En ambos casos, la actividad enzimática aumentó en presencia de Ca2+ y disminuyó con inhibidores como EDTA y peróxido de hidrógeno. Además, ambas lipasas contenidas en los extractos crudos mostraron estabilidad en hexano y etanol, con una mejora en la actividad lipolítica. En la hidrólisis de aceites, las lipasas de LMB-06 y LMB-Ju02 lograron hidrolizar aceites de oliva, girasol, palma y pescado, alcanzando un 2.9% y 17.6% de hidrólisis en aceite de pescado y de oliva, respectivamente. Con el secuenciamiento del genoma se logró identificar una secuencia de lipasa en LMB-06 y LMB-Ju02, ocho en LMB-JH06 y tres en LMB-JH07. En conclusión, las cepas aisladas presentan un notable potencial para la hidrólisis y esterificación de aceites triglicéridos, lo que podría incrementar significativamente el valor nutricional y económico de los aceites de pescado en Perú.Enrichment of polyunsaturated fatty acids, particularly ω-3 fatty acids, is a strategy adopted to enhance the nutritional value of oils. Among the various methodologies, enzymatic hydrolysis via lipases has garnered substantial interest within the oil industry. However, the limited availability of lipases necessitates the discovery of more efficient novel enzymes, preferably of microbial origin. In this study, bacterial strains were isolated from the intestines of fish and screened using natural and synthetic ester substrates. Ten strains with potential lipolytic activity were preselected through qualitative assessments, with the genus Staphylococcus being predominant, as identified by 16S rRNA gene sequencing. Of the identified strains, LMB-06 (S. urealyticus), LMB-Ju02 (S. urealyticus), LMB-JH06 (S. epidermidis) and LMB-JH07 (S. warneri) demonstrated high lipolytic activity. LMB-06 and LMB-Ju02 were selected to produce lipolytic extracts due to their superior activity in nitrogen-rich media. The crude extracts containing lipases were partially characterized. The optimal pH for the lipases was 7 with optimal temperatures of 30°C for LMB-06 and 37°C for LMB-Ju02. Enzymatic activity increased in the presence of Ca2+, while inhibitors such as EDTA and hydrogen peroxide reduced activity. Additionally, both lipases contained in the crude extracts exhibited stability in organic solvents such as hexane and ethanol, which also enhanced their lipolytic activity. When applied to the hydrolysis of various oils, the lipases from LMB-06 and LMB-Ju02 effectively hydrolyzed olive, sunflower, palm, and fish oils, achieving hydrolysis rates of 2.9% and 17.6% for fish and olive oils, respectively. Genome sequencing and subsequent analysis revealed the presence of one lipase gene in both LMB-06 and LMB-Ju02, eight in LMB-JH06, and three in LMB-JH07. In conclusion, the isolated bacterial strains exhibit significant potential for the hydrolysis and esterification of triglyceride-containing oils. This enzymatic capability could substantially improve both the nutritional and economic value of fish oils produced in Peru.application/pdfspaUniversidad Nacional Agraria La MolinaPEinfo:eu-repo/semantics/openAccesshttps://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/BacteriasLipasasTriglicéridoshttps://purl.org/pe-repo/ocde/ford#1.06.16Aislamiento y selección de bacterias productoras de Lipasas nativas altamente selectivas sobre triglicéridosinfo:eu-repo/semantics/bachelorThesisinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionreponame:UNALM-Institucionalinstname:Universidad Nacional Agraria La Molinainstacron:UNALMSUNEDUBiologíaUniversidad Nacional Agraria La Molina. Facultad de CienciasBiólogo71249096https://orcid.org/0000-0002-2745-733Xhttps://orcid.org/0000-0001-8123-35592399885009753335https://purl.org/pe-repo/renati/type#tesishttps://purl.org/pe-repo/renati/level#tituloProfesional511206Zúñiga Dávila, ElizabethMansilla Samaniego, Roberto CarlosOgatta Gutiérrez, KattyLICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-81664https://repositorio.lamolina.edu.pe/bitstreams/30d0bb25-a244-428e-9565-b83526c24c86/download97c5bee00fbb4c4f8867bd742b579336MD51ORIGINALhuarcaya-calderon-margaret-melissa.pdfhuarcaya-calderon-margaret-melissa.pdfTexto completoapplication/pdf5976516https://repositorio.lamolina.edu.pe/bitstreams/47ea57f9-8ee2-4631-a21c-acc2043a43f4/download53e9a21b86c6d708a00a35852f87f9e6MD52Autorización.pdfAutorización.pdfAutorizaciónapplication/pdf3575602https://repositorio.lamolina.edu.pe/bitstreams/73ed1ab6-52d9-42a3-a9eb-e82810c48c37/downloadf6e78706b0d437857fc5b0dfbdd927f8MD53Informe originalidad.pdfInforme originalidad.pdfInforme originalidadapplication/pdf2321366https://repositorio.lamolina.edu.pe/bitstreams/7d45b191-2861-4dca-bdd7-cf9396d6347f/download3a046145b9e785a1548269e0909a8cb9MD54TEXThuarcaya-calderon-margaret-melissa.pdf.txthuarcaya-calderon-margaret-melissa.pdf.txtExtracted texttext/plain101719https://repositorio.lamolina.edu.pe/bitstreams/84b13a17-930c-4c79-a022-adbcd02cf158/download30c191c03cb9dce0d91dc52ab33c6316MD55Autorización.pdf.txtAutorización.pdf.txtExtracted texttext/plain22586https://repositorio.lamolina.edu.pe/bitstreams/ef554f3d-d038-47f2-bad8-8073da3eb811/download30edb2247c51c2b4bb11b690edfb76acMD57Informe originalidad.pdf.txtInforme originalidad.pdf.txtExtracted texttext/plain15232https://repositorio.lamolina.edu.pe/bitstreams/877b64f8-e77f-42a1-bd56-1cdcf2f01fd4/downloadfcccd96804d35d7353bb7e4c7725ca50MD59THUMBNAILhuarcaya-calderon-margaret-melissa.pdf.jpghuarcaya-calderon-margaret-melissa.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg4095https://repositorio.lamolina.edu.pe/bitstreams/98844133-3d7d-4a63-98d8-83da520d1d79/download3844f0d32641856b2e316a420df5a84cMD56Autorización.pdf.jpgAutorización.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg5113https://repositorio.lamolina.edu.pe/bitstreams/33b99f82-a2c8-4516-ad40-8da1ac45d30d/downloadce49ea42f775a255af377d4ffe759fe0MD58Informe originalidad.pdf.jpgInforme originalidad.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg2699https://repositorio.lamolina.edu.pe/bitstreams/df74a271-1541-4d43-9147-baffb814daff/downloadbdec78225496330e1ce3e326f55efd58MD51020.500.12996/6897oai:repositorio.lamolina.edu.pe:20.500.12996/68972025-01-24 16:39:42.287https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/info:eu-repo/semantics/openAccessopen.accesshttps://repositorio.lamolina.edu.peRepositorio Universidad Nacional Agraria La Molinadspace@lamolina.edu.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