Obtención de biopelículas fúngicas mixtas de Trichoderma reesei y Aspergillus spp. Y análisis de expresión génica de celulasas mediante PCR cuantitativa

Descripción del Articulo

Universidad Nacional Agraria La Molina. Facultad de Ciencias. Departamento Académico de Biología
Detalles Bibliográficos
Autor: García Luquillas, Katherine Ruth
Formato: tesis de grado
Fecha de Publicación:2020
Institución:Universidad Nacional Agraria La Molina
Repositorio:UNALM-Institucional
Lenguaje:español
OAI Identifier:oai:repositorio.lamolina.edu.pe:20.500.12996/4424
Enlace del recurso:https://hdl.handle.net/20.500.12996/4424
Nivel de acceso:acceso abierto
Materia:Celulasa
Enzimas
Trichoderma
Aspergillus
Hongos
Cultivos iniciadores
Trichoderma reesei
PCR
Marcadores genéticos
Métodos de ensayo
Respuesta de la planta
Experimentación en laboratorio
Evaluación
Perú
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Con el propósito de obtener biopelículas óptimas para realizar el estudio, se modificaron factores determinantes como la velocidad de agitación, cepas, soporte, etapas de cultivo, porcentaje de inóculo y fuente de carbono. Tras 24 horas de cultivo en presencia de carboximetilcelulosa (CMC), las biopelículas mixtas exhibieron mayor actividad enzimática β-endoglucanasa que las respectivas biopelículas simples, mientras que la actividad β-glucosidasa en el sistema mixto fue mayor solamente con respecto al monocultivo de T. reesei. Asimismo, a nivel de productividad, la sinergia observada en el sistema mixto fue significativa solamente con respecto a la biopelícula simple de T. reesei. Para determinar qué genes eran responsables del sinergismo enzimático observado, se diseñaron cebadores específicos para cada hongo. Los resultados del análisis de expresión génica mediante qPCR indicaron que la actividad β-glucosidasa observada en las biopelículas mixtas se debe al aporte de T. reesei y no de A. niger. Se concluyó que el diálogo molecular establecido entre ambos hongos en la biopelícula mixta promueve la producción de celulasas en T. reesei, descartándose que el sinergismo sea consecuencia de una complementariedad de funciones enzimáticas, sino más bien de los mecanismos de regulación que tienen lugar en la interacción interespecífica.Fungal biofilm fermentative systems are of high industrial importance due to its high efficiency in the production of cellulolytic and lignocellulolytic enzymes. On the other hand, mixed cultures have exhibited high cellulase enzyme titer and the expression of biosynthetic pathways that are not active in monocultures. In this study, mixed biofilms of Trichoderma reesei QM6a and Aspergillus niger ATCC 10864 were compared against their respective monocultures in respect of the cellulolytic enzyme activity and gene expression analysis of cellulase genes and its regulators. In order to obtain optimal biofilms to carry out the study, determining factors such as agitation speed, compatibility between strains, holder, cultivation phases, inoculum percentage and carbon source were modified. After 24 hours of culture with carboxymethylcellulose (CMC), these mixed biofilms exhibited higher endoglucanase enzymatic activity than the respective simple biofilms, while the βglucosidase activity in the mixed system was higher only with respect to T. reesei monoculture. Likewise, at the productivity level, the synergy observed in the mixed system was significant only with respect to simple biofilm of T. reesei. To determine which genes were responsible for the observed enzyme synergism, specific primers were designed for each fungus. The results of gene expression analysis by qPCR indicated that the βglucosidase activity observed in mixed biofilms is due to the contribution of T. reesei and not of A. niger. It was concluded that molecular dialogue established Between both fungi in the mixed biofilm promotes the production of cellulases in T. reesei, ruling out that the synergism is consequence of an enzymatic functions complementarity, but rather to the regulatory mechanisms that take place in the interspecific interaction.Tesisapplication/pdfspaUniversidad Nacional Agraria La MolinaPEinfo:eu-repo/semantics/openAccesshttps://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/CelulasaEnzimasTrichodermaAspergillusHongosCultivos iniciadoresTrichoderma reeseiPCRMarcadores genéticosMétodos de ensayoRespuesta de la plantaExperimentación en laboratorioEvaluaciónPerúhttp://purl.org/pe-repo/ocde/ford#1.06.01Obtención de biopelículas fúngicas mixtas de Trichoderma reesei y Aspergillus spp. Y análisis de expresión génica de celulasas mediante PCR cuantitativainfo:eu-repo/semantics/bachelorThesisinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionreponame:UNALM-Institucionalinstname:Universidad Nacional Agraria La Molinainstacron:UNALMSUNEDUBiologíaUniversidad Nacional Agraria La Molina. Facultad de CienciasBiólogo47787311https://orcid.org/0000-0002-1883-779510542748https://purl.org/pe-repo/renati/type#tesishttps://purl.org/pe-repo/renati/level#tituloProfesional511206Espejo Joya, Rosa AmeliaKitazono Sugahara, Ana AkemiVillena Chávez, Gretty KatherinaTEXTgarcia-luquillas-katherine-ruth.pdf.txtgarcia-luquillas-katherine-ruth.pdf.txtExtracted texttext/plain215420https://repositorio.lamolina.edu.pe/bitstreams/87f44f56-b79e-46c0-873f-e029866a8b7f/download1e7d06fdf94df7bb190436f7329d70aeMD53THUMBNAILgarcia-luquillas-katherine-ruth.pdf.jpggarcia-luquillas-katherine-ruth.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg3275https://repositorio.lamolina.edu.pe/bitstreams/56338fd4-1e02-49fc-8d01-f2d530f2d76b/downloada7debc0714ff57865809f9677fd5e0a0MD54ORIGINALgarcia-luquillas-katherine-ruth.pdfgarcia-luquillas-katherine-ruth.pdfTexto completoapplication/pdf4400395https://repositorio.lamolina.edu.pe/bitstreams/2aee51ba-c1c4-4469-8309-9788e3a2a73c/download2109ba9502eb0c2572a2a279ee58afd0MD51LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-81683https://repositorio.lamolina.edu.pe/bitstreams/09582b33-cf55-4db4-83b9-710de67fd21f/download85e652b8dfa19b82485c505314e0a902MD5220.500.12996/4424oai:repositorio.lamolina.edu.pe:20.500.12996/44242025-04-07 10:56:51.11https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/info:eu-repo/semantics/openAccessopen.accesshttps://repositorio.lamolina.edu.peRepositorio Universidad Nacional Agraria La Molinadspace@lamolina.edu.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