Análisis molecular de la fracción <10 kDa de la apitoxina de Apis mellifera y su efecto sobre la apoptosis celular
Descripción del Articulo
Universidad Nacional Agraria La Molina. Facultad de Ciencias. Departamento Académico de Biología
| Autor: | |
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| Formato: | tesis de grado |
| Fecha de Publicación: | 2019 |
| Institución: | Universidad Nacional Agraria La Molina |
| Repositorio: | UNALM-Institucional |
| Lenguaje: | español |
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| Enlace del recurso: | https://hdl.handle.net/20.500.12996/4184 |
| Nivel de acceso: | acceso abierto |
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Moreno Díaz de Saco, Patricia AngélicaTalledo Albújar, MIchael Jhon53841812-957c-4a10-8f98-d85c889df76dCuya Lozada, Gianina Leonor2019-11-19T20:12:54Z2019-11-19T20:12:54Z2019L50.C8-T BAN UNALMhttps://hdl.handle.net/20.500.12996/4184Universidad Nacional Agraria La Molina. Facultad de Ciencias. Departamento Académico de BiologíaLa apitoxina tiene diversas propiedades medicinales, antimicrobianas, antiinflamatorias, antivirales, antiproliferativas y anticancerígenas. Sin embargo, no se tienen estudios del efecto que tiene la apitoxina o de sus fracciones de menor peso molecular sobre las células humanas infectadas con el virus linfotrópico de células T humanas (HTLV-1). En esta tesis se evaluó el efecto que tienen los componentes de la fracción <10 kDa de la apitoxina de Apis mellifera sobre la apoptosis de dos líneas celulares, la K562 que no está infectada con HTLV-1 y la MT-2 que sí lo está. Se cultivaron dichas líneas celulares con diferentes concentraciones de la fracción <10 kDa (K562 con 0.25, 1, 5 y 10 μg/mL; MT-2 con 1, 5, 10, 15 y 20 μg/mL). Se ha observado que para lograr una disminución significativa (=0.05) del total de células vivas de ambas líneas celulares se requiere como mínimo de una concentración 5 μg/mL, respectivamente. La CI50 indicó que la fracción <10 kDa es más citotóxica para las células K562 (CI50=9.1 μg/mL) que para las células MT-2 (CI50=33.7 μg/mL). También, se determinó la activación de la muerte celular apoptótica detectando la activación de las caspasas ejecutoras 3/7 en los diferentes tratamientos con la fracción <10 kDa (K562: 1 y 5 μg/mL; MT-2: 1, 5, 10 μg/mL) por citometría de flujo, observándose que hay un incremento de la apoptosis con diferencias estadísticamente significativas (=0.05) en los tratamientos con concentraciones de 5 μg/mL para K562; y de 1, 5 y 10 μg/mL para MT-2. Asimismo, se evaluó la muerte celular por citometría, encontrándose un incremento de las células muertas con diferencias significativas (=0.05) en las células tratadas con las concentraciones de 5 μg/mL para K562 y de 10 μg/mL para MT-2. Finalmente, se caracterizó por cromatografía líquida de ultra alta resolución (UHPLC, por sus siglas en inglés) esta fracción <10 kDa, determinando que tiene 17.4 μg/mL de melitina y no se detectó la presencia de fosfolipasa A2.Bee venom has different medicinal, antimicrobial, anti-inflamatory, antiviral, antiproliferative and anticancer properties. However, there are no studies of the effect that bee venom or its protein fractions of less molecular weight have in HTLV-1 infected cells. In the present thesis, it has been assessed in-vitro effect of <10 kDa fraction components of Apis mellifera bee venom in the apoptosis of two cell lines, K562 which is non-infected with the virus and MT-2 which is infected with HTLV-1. These cell lines were cultured with different concentrations of the <10 kDa fraction (K562 with 0.25, 1, 5 y 10 μg/mL; MT-2 with 1, 5, 10, 15 y 20 μg/mL). It was observed that it is necessary 5 μg/mL to cause a significant decrease (=0.05) in total alive K562 and MT-2 cell. IC50 indicates that <10 kDa fraction is more cytotoxic for K562 cells (IC50=9.1 μg/mL) than MT-2 cells (CI50=33.7 μg/mL). Further, it was determined apoptotic cell death activation measuring 3/7 executioner caspases activation at different concentrations (K562: 1 y 5 μg/mL; MT-2: 1, 5, 10 μg/mL) by flow cytometry, observing that there is an increase of apoptosis with statistically significant differences (=0.05) in treatments with concentrations of 5 μg/mL for K562; and 1, 5, 10 μg/mL for MT-2. Likewise, death cell was evaluated by flow cytometry, finding an increase of death cells with significant differences (=0.05) in treatments with concentrations of 5 μg/mL for K562 and 10 μg/mL for MT-2. Finally, this <10 kDa fraction was characterized by UHPLC, determining that it has 17.4 μg/mL of melittin and the presence of phospholipase A2 was not detected.Tesisapplication/pdfspaUniversidad Nacional Agraria La MolinaPEinfo:eu-repo/semantics/openAccesshttps://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/Veneno de abejaApis MelliferaApoptosisEnfermedades humanasRetroviridaeAnálisis biológicoCélulasPropiedades medicinalesMecanismos de acciónEvaluaciónPerúApitoxinaAnálisis molecularApoptosis celularhttp://purl.org/pe-repo/ocde/ford#1.06.11Análisis molecular de la fracción <10 kDa de la apitoxina de Apis mellifera y su efecto sobre la apoptosis celularinfo:eu-repo/semantics/bachelorThesisinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionreponame:UNALM-Institucionalinstname:Universidad Nacional Agraria La Molinainstacron:UNALMSUNEDUBiologíaUniversidad Nacional Agraria La Molina. Facultad de CienciasBiólogo10867001https://orcid.org/0000-0001-7375-440X0820213907265671https://purl.org/pe-repo/renati/type#tesishttps://purl.org/pe-repo/renati/level#tituloProfesional511206Kitazono Sugahara, Ana AkemiMeza Contreras, Víctor JuanRíos Ríos, Elva MaríaTEXTcuya-lozada-gianina-leonor.pdf.txtcuya-lozada-gianina-leonor.pdf.txtExtracted texttext/plain154243https://repositorio.lamolina.edu.pe/bitstreams/fb8891cc-2a8b-4a2a-a706-85e060400a64/download58ee984094000f8690d826b3e831bf81MD54L50-C8-T-resumen.pdf.txtL50-C8-T-resumen.pdf.txtExtracted texttext/plain4574https://repositorio.lamolina.edu.pe/bitstreams/75c6bc0f-42c3-4a0f-a503-b97657e707d6/download49aa847887054cfb97bc5125c01c8196MD56THUMBNAILcuya-lozada-gianina-leonor.pdf.jpgcuya-lozada-gianina-leonor.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg3084https://repositorio.lamolina.edu.pe/bitstreams/4b1679a9-05be-4261-842e-81c08e26f2ec/downloadb8d81fd2d483d06ef5dd25f52fd5b149MD55L50-C8-T-resumen.pdf.jpgL50-C8-T-resumen.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg2966https://repositorio.lamolina.edu.pe/bitstreams/37341e8c-70d7-478d-854f-9b1fe2a91e83/download16d1b01ce470faf5302e99754abc2237MD57ORIGINALcuya-lozada-gianina-leonor.pdfcuya-lozada-gianina-leonor.pdfTexto completoapplication/pdf4459820https://repositorio.lamolina.edu.pe/bitstreams/44b11bbe-e66e-4f9d-9c3f-ec3caa341282/downloade8adc5994f01201d4bb8423e6f5aba1eMD51L50-C8-T-resumen.pdfL50-C8-T-resumen.pdfResumenapplication/pdf133942https://repositorio.lamolina.edu.pe/bitstreams/418d01a6-d394-477e-bb3b-e32bbf96fa9d/downloadfa7949ad800c3879c3d5e0fa4e683dcdMD53LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-81683https://repositorio.lamolina.edu.pe/bitstreams/b4afb50c-377a-43c3-8d98-806e68e964d0/download85e652b8dfa19b82485c505314e0a902MD5220.500.12996/4184oai:repositorio.lamolina.edu.pe:20.500.12996/41842025-03-21 14:37:23.045https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/info:eu-repo/semantics/openAccessopen.accesshttps://repositorio.lamolina.edu.peRepositorio Universidad Nacional Agraria La Molinadspace@lamolina.edu.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 |
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