Obtención de variantes de ferritina de soya con selectividad para cadmio mediante clonación y mutagénesis in vivo en Saccharomyces cerevisiae

Descripción del Articulo

Universidad Nacional Agraria La Molina. Escuela de Posgrado. Doctorado en Ciencias e Ingeniería Biológicas
Detalles Bibliográficos
Autor: Riveros Alcedo, Renato Gonzalo
Formato: tesis doctoral
Fecha de Publicación:2024
Institución:Universidad Nacional Agraria La Molina
Repositorio:UNALM-Institucional
Lenguaje:español
OAI Identifier:oai:repositorio.lamolina.edu.pe:20.500.12996/6335
Enlace del recurso:https://hdl.handle.net/20.500.12996/6335
Nivel de acceso:acceso abierto
Materia:Biorremediación
https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#1.07.00
id UNAL_1f021716ccd7672eb2b30faa4e4969db
oai_identifier_str oai:repositorio.lamolina.edu.pe:20.500.12996/6335
network_acronym_str UNAL
network_name_str UNALM-Institucional
repository_id_str 3039
dc.title.es_PE.fl_str_mv Obtención de variantes de ferritina de soya con selectividad para cadmio mediante clonación y mutagénesis in vivo en Saccharomyces cerevisiae
title Obtención de variantes de ferritina de soya con selectividad para cadmio mediante clonación y mutagénesis in vivo en Saccharomyces cerevisiae
spellingShingle Obtención de variantes de ferritina de soya con selectividad para cadmio mediante clonación y mutagénesis in vivo en Saccharomyces cerevisiae
Riveros Alcedo, Renato Gonzalo
Biorremediación
https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#1.07.00
title_short Obtención de variantes de ferritina de soya con selectividad para cadmio mediante clonación y mutagénesis in vivo en Saccharomyces cerevisiae
title_full Obtención de variantes de ferritina de soya con selectividad para cadmio mediante clonación y mutagénesis in vivo en Saccharomyces cerevisiae
title_fullStr Obtención de variantes de ferritina de soya con selectividad para cadmio mediante clonación y mutagénesis in vivo en Saccharomyces cerevisiae
title_full_unstemmed Obtención de variantes de ferritina de soya con selectividad para cadmio mediante clonación y mutagénesis in vivo en Saccharomyces cerevisiae
title_sort Obtención de variantes de ferritina de soya con selectividad para cadmio mediante clonación y mutagénesis in vivo en Saccharomyces cerevisiae
author Riveros Alcedo, Renato Gonzalo
author_facet Riveros Alcedo, Renato Gonzalo
author_role author
dc.contributor.advisor.fl_str_mv Kitazono Sugahara, Ana Akemi
dc.contributor.author.fl_str_mv Riveros Alcedo, Renato Gonzalo
dc.subject.es_PE.fl_str_mv Biorremediación
topic Biorremediación
https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#1.07.00
dc.subject.ocde.es_PE.fl_str_mv https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#1.07.00
description Universidad Nacional Agraria La Molina. Escuela de Posgrado. Doctorado en Ciencias e Ingeniería Biológicas
publishDate 2024
dc.date.accessioned.none.fl_str_mv 2024-03-12T17:40:41Z
dc.date.available.none.fl_str_mv 2024-03-12T17:40:41Z
dc.date.issued.fl_str_mv 2024
dc.type.es_PE.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
dc.type.version.es_PE.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
format doctoralThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.none.fl_str_mv https://hdl.handle.net/20.500.12996/6335
url https://hdl.handle.net/20.500.12996/6335
dc.language.iso.es_PE.fl_str_mv spa
language spa
dc.relation.ispartof.fl_str_mv SUNEDU
dc.rights.es_PE.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
dc.rights.uri.es_PE.fl_str_mv https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
eu_rights_str_mv openAccess
rights_invalid_str_mv https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
dc.format.es_PE.fl_str_mv application/pdf
dc.publisher.es_PE.fl_str_mv Universidad Nacional Agraria La Molina
dc.publisher.country.es_PE.fl_str_mv PE
dc.source.none.fl_str_mv reponame:UNALM-Institucional
instname:Universidad Nacional Agraria La Molina
instacron:UNALM
instname_str Universidad Nacional Agraria La Molina
instacron_str UNALM
institution UNALM
reponame_str UNALM-Institucional
collection UNALM-Institucional
bitstream.url.fl_str_mv https://repositorio.lamolina.edu.pe/bitstreams/9d992677-c167-4e7c-b1d2-b58423c1226d/download
https://repositorio.lamolina.edu.pe/bitstreams/e4d00c73-007d-4b50-9676-af372f8420d6/download
https://repositorio.lamolina.edu.pe/bitstreams/69ad1b8c-95b3-4f85-bcbc-89ff7f15b6ba/download
https://repositorio.lamolina.edu.pe/bitstreams/aa52ea1e-cbfc-401c-b44b-924f64e38c7b/download
https://repositorio.lamolina.edu.pe/bitstreams/29cdba34-f452-4611-b90a-ac8cf50cbfd6/download
https://repositorio.lamolina.edu.pe/bitstreams/0da7e266-5907-458d-89cf-08a640756131/download
https://repositorio.lamolina.edu.pe/bitstreams/21f517b2-c16c-4962-b14e-b1073e98f442/download
https://repositorio.lamolina.edu.pe/bitstreams/06110a5d-ccc6-47d1-8974-7c59e224ce63/download
https://repositorio.lamolina.edu.pe/bitstreams/4f7078a8-1147-4d19-8036-ec78f6e7fc0d/download
https://repositorio.lamolina.edu.pe/bitstreams/2ff6d365-9320-4eb0-9c11-9d047b29c497/download
bitstream.checksum.fl_str_mv 97c5bee00fbb4c4f8867bd742b579336
f9507ebbdb8060bd762b10b7c4c12ed5
83482d2ffd4abbf2a937fb8105b04bf4
8e1bee9e05cd98bdda9823311d5ef74c
e5dff03fb4fc11648fc9123ed41e8f05
1f0ee0c0b3084e9d5a797b191ff85ccf
3ded4c4fa94b9f5afa680ca27d67e890
afd04f88a9b8a3814a68c632b7d0c6fd
ac4c9d250740374f427cd7e3f093184a
37932c19eca35b4d8b94d72bc9d24991
bitstream.checksumAlgorithm.fl_str_mv MD5
MD5
MD5
MD5
MD5
MD5
MD5
MD5
MD5
MD5
repository.name.fl_str_mv Repositorio Universidad Nacional Agraria La Molina
repository.mail.fl_str_mv dspace@lamolina.edu.pe
_version_ 1843804471779393536
spelling Kitazono Sugahara, Ana Akemi8f5c8aaa-a5ae-4d0d-ac7a-2b2dff24d08cRiveros Alcedo, Renato Gonzalo2024-03-12T17:40:41Z2024-03-12T17:40:41Z2024https://hdl.handle.net/20.500.12996/6335Universidad Nacional Agraria La Molina. Escuela de Posgrado. Doctorado en Ciencias e Ingeniería BiológicasLa ferritina es una proteína multimérica que almacena miles de iones férricos en numerosos organismos. A pesar de estar ausente en Saccharomyces cerevisiae, esta levadura es capaz de producir ferritinas heterólogas funcionales, como la subunidad H1 de la soya (sH1). Su selectividad hacia el hierro se basa en la actividad ferroxidasa, lo que permite la oxidación de iones ferrosos y su posterior almacenamiento. Asimismo, esta proteína también exhibe afinidades con el cadmio, y ejemplos importantes son las ferritinas de arveja y de caballo. Una comparación de las secuencias aminoacídicas de estas ferritinas permitió identificar una región que podría ser responsable de las diferentes especificidades. Por tanto, este estudio tuvo como objetivo producir en S. cerevisiae variantes de ferritina de soya con aumentada selectividad para cadmio. Por un lado, se incorporaron en sH1 dos aminoácidos de la secuencia de caballo y cinco de la de arveja, logrando la producción de la variante sH1hp en levadura, confiriendo una mayor resistencia al cadmio. Logrado esto, la región de cinco aminoácidos se sometió a mutagénesis aleatoria. La estrategia de clonación in vivo permitió la construcción eficiente de una biblioteca de plásmidos y la expresión inmediata de las variantes en S. cerevisiae. El tamizado de los transformantes obtenidos permitió identificar la variante sH1trc, que permitió el crecimiento de los transformantes en medios suplementados con cadmio. Además, para reducir la afinidad de las variantes de ferritina hacia el hierro, se mutaron los aminoácidos responsables de la actividad ferroxidasa. Finalmente, los extractos de proteína termoestable se sometieron a análisis por SDS-PAGE y cuantificación de cadmio. Se verificó así la producción de variantes de ferritina termoestables y que las variantes que carecían de actividad ferroxidasa tenían el mayor contenido de cadmio. En consecuencia, se logró una remoción de cadmio de hasta el 80 por ciento con estas variantes.Ferritin is a multimeric protein that stores thousands of ferric ions in numerous organisms, but one important exception is Saccharomyces cerevisiae. However, this yeast can produce high levels of functional heterologous ferritins, such as the soybean H1 subunit (sH1). Iron selectivity is based on ferroxidase activity, which allows the oxidation of ferrous ions and their eventual efficient storage. Likewise, this protein also exhibits affinities to other metal ions such as cadmium, important examples being pea and horse ferritins. A comparison of the amino acid sequences of these ferritins allowed the identification of a region that might be responsible for the different specificities. Therefore, this study aimed to produce soybean ferritin variants with increased cadmium selectivity in S. cerevisiae. On the one hand, two amino acids from horse ferritin and five from pea ferritin were incorporated into sH1, achieving the production of the sH1hp variant in yeast cells, which exhibited a greater resistance to cadmium. Once this was achieved, the five amino acid region was subjected to random mutagenesis. The in vivo cloning approach allowed the efficient construction of a plasmid library and the immediate expression of the variants in S. cerevisiae. The screening of the yeast transformants obtained allowed the identification of the sH1trc variant, which allowed the growth of the yeast transformants in media containing high concentrations of cadmium. Furthermore, to reduce the affinity of the ferritin variants towards iron, the amino acids responsible for the ferroxidase activity were also mutated. Finally, the thermostable protein fractions were subjected to analysis by SDS-PAGE and quantification of cadmium. With these assays, it was verified the production of thermostable ferritin variants and, in addition, that the variants that lacked ferroxidase activity had the highest cadmium content. Consequently, cadmium removal of up to 80 per cent was achieved with these variants.application/pdfspaUniversidad Nacional Agraria La MolinaPEinfo:eu-repo/semantics/openAccesshttps://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/Biorremediaciónhttps://purl.org/pe-repo/ocde/ford#1.07.00Obtención de variantes de ferritina de soya con selectividad para cadmio mediante clonación y mutagénesis in vivo en Saccharomyces cerevisiaeinfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionreponame:UNALM-Institucionalinstname:Universidad Nacional Agraria La Molinainstacron:UNALMSUNEDUCiencias e Ingeniería BiológicasUniversidad Nacional Agraria La Molina. Escuela de PosgradoDoctoris Philosophiae - Ciencias e Ingeniería Biológicas45922886https://orcid.org/0000-0002-6924-179906126645https://purl.org/pe-repo/renati/type#tesishttps://purl.org/pe-repo/renati/level#doctor511018Zolla Benites, Gastón EnriqueSamolski Klein, IlanitOrmeño Orrillo, Ernesto AldoTamariz Ángeles, Carmen del RosarioLICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-81664https://repositorio.lamolina.edu.pe/bitstreams/9d992677-c167-4e7c-b1d2-b58423c1226d/download97c5bee00fbb4c4f8867bd742b579336MD54TEXTriveros-alcedo-renato-gonzalo.pdf.txtriveros-alcedo-renato-gonzalo.pdf.txtExtracted texttext/plain154820https://repositorio.lamolina.edu.pe/bitstreams/e4d00c73-007d-4b50-9676-af372f8420d6/downloadf9507ebbdb8060bd762b10b7c4c12ed5MD55Informe Originalidad.pdf.txtInforme Originalidad.pdf.txtExtracted texttext/plain3709https://repositorio.lamolina.edu.pe/bitstreams/69ad1b8c-95b3-4f85-bcbc-89ff7f15b6ba/download83482d2ffd4abbf2a937fb8105b04bf4MD57Autorización.pdf.txtAutorización.pdf.txtExtracted texttext/plain1860https://repositorio.lamolina.edu.pe/bitstreams/aa52ea1e-cbfc-401c-b44b-924f64e38c7b/download8e1bee9e05cd98bdda9823311d5ef74cMD58THUMBNAILriveros-alcedo-renato-gonzalo.pdf.jpgriveros-alcedo-renato-gonzalo.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg3443https://repositorio.lamolina.edu.pe/bitstreams/29cdba34-f452-4611-b90a-ac8cf50cbfd6/downloade5dff03fb4fc11648fc9123ed41e8f05MD56Autorización.pdf.jpgAutorización.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg4353https://repositorio.lamolina.edu.pe/bitstreams/0da7e266-5907-458d-89cf-08a640756131/download1f0ee0c0b3084e9d5a797b191ff85ccfMD59Informe Originalidad.pdf.jpgInforme Originalidad.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg3336https://repositorio.lamolina.edu.pe/bitstreams/21f517b2-c16c-4962-b14e-b1073e98f442/download3ded4c4fa94b9f5afa680ca27d67e890MD510ORIGINALriveros-alcedo-renato-gonzalo.pdfriveros-alcedo-renato-gonzalo.pdfTexto completoapplication/pdf6563393https://repositorio.lamolina.edu.pe/bitstreams/06110a5d-ccc6-47d1-8974-7c59e224ce63/downloadafd04f88a9b8a3814a68c632b7d0c6fdMD51Informe Originalidad.pdfInforme Originalidad.pdfapplication/pdf22144699https://repositorio.lamolina.edu.pe/bitstreams/4f7078a8-1147-4d19-8036-ec78f6e7fc0d/downloadac4c9d250740374f427cd7e3f093184aMD52Autorización.pdfAutorización.pdfapplication/pdf65038https://repositorio.lamolina.edu.pe/bitstreams/2ff6d365-9320-4eb0-9c11-9d047b29c497/download37932c19eca35b4d8b94d72bc9d24991MD5320.500.12996/6335oai:repositorio.lamolina.edu.pe:20.500.12996/63352024-09-29 00:42:14.32https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/info:eu-repo/semantics/openAccessopen.accesshttps://repositorio.lamolina.edu.peRepositorio Universidad Nacional Agraria La Molinadspace@lamolina.edu.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
score 12.686995
Obtención de variantes de ferritina de soya con selectividad para cadmio mediante clonación y mutagénesis in vivo en Saccharomyces cerevisiae
Nota importante:
La información contenida en este registro es de entera responsabilidad de la institución que gestiona el repositorio institucional donde esta contenido este documento o set de datos. El CONCYTEC no se hace responsable por los contenidos (publicaciones y/o datos) accesibles a través del Repositorio Nacional Digital de Ciencia, Tecnología e Innovación de Acceso Abierto (ALICIA).

Ejemplares Similares