Evaluación del perfil inmunomodulador del secretoma de células estromales mesenquimales humanas de gelatina de Wharton pretratadas con antígeno soluble de Leishmania braziliensis

• Autor: Pajuelo Reyes, Cecilia Isabel
• Formato: tesis de maestría
• Fecha de Publicación: 2022
• Institución: Universidad Peruana Cayetano Heredia
• Repositorio: UPCH-Institucional
• Lenguaje: español
• OAI Identifier: oai:repositorio.upch.edu.pe:20.500.12866/12491
• Enlace del recurso: https://hdl.handle.net/20.500.12866/12491
• Nivel de acceso: acceso abierto
• Materia: Leishmania braziliensis; Secretoma; Células Estromales Mesenquimales; Antígeno Soluble; PBMCs; https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#3.01.03; https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#3.02.15; https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#3.03.06

La Leishmania braziliensis es la principal especie en el Perú que causa Leishmaniasis cutánea y mucocutánea. La gravedad de sus úlceras se relaciona con una reacción inflamatoria exacerbada, por lo que terapias basadas en el secretoma de células estromales mesenquimales (CEM) podrían ser consideradas. El secretoma de las CEM presenta capacidad regenerativa e inmunomoduladora, la cual, incluso, puede ser potenciada cuando se exponen a diversos estímulos o pretratamientos. En este sentido, el objetivo del presente proyecto fue caracterizar el secretoma de las CEM humanas pretratadas con antígeno soluble de L. braziliensis y evaluar su potencial inmunomodulador. Se trabajó con CEMh de gelatina de Wharton las cuales fueron estabilizadas y caracterizadas según los estándares internacionales. En el pase 4 las células fueron pretratadas con antígeno soluble de L. braziliensis (ASL) y LPS como control positivo. Luego del pretratamiento el secretoma obtenido a las 72h fue caracterizado en su expresión de citoquinas, mediante un panel de quimioluminiscencia de 80 blancos, ensayos colorimétricos para medir IDO, IL-6 e iNOS/NO. Además, la capacidad inmunomoduladora fue evaluada en ensayos funcionales con PBMC humanos (n=3), midiendo por citometría de flujo el índice de proliferación linfocitaria y la presencia de poblaciones CD4+ y CD8+, así como subpoblaciones de linfocitos Treg y Th1. Los resultados mostraron un perfil antinflamatorio a nivel de expresión de citoquinas para el pretratamiento con ASL y LPS. Ambos se caracterizaron por una menor expresión de citoquinas proinflamatorias IL-8, TNFα y GRO e incremento de IGFBP-4. Asimismo el LPS produjo un aumento significativo de iNOS y disminución de IL-6, mientras que ASL produjo una disminución significativa de iNOS/NO e IDO. El ensayo funcional no evidenció un efecto antiproliferativo e inmunomodulador significativo para el ASL pero si tendencias a la disminución de las poblaciones proinflamatorias Th1 y CD8+INFγ+ asi como en el aumento de la relación de Treg/Th1. En conclusión el secretoma de las CEMh de gelatina de Wharton pretratadas con ASL presenta diferencias a nivel de expresión de citoquinas con una tendencia a un perfil antinflamatorio, pero sin producir efectos significativos a nivel funcional en cultivos de PBMC de 3 voluntarios.