Estandarización de técnicas neuroanatómicas y conductuales para evaluar el rol de la proteína priónica en el desarrollo del sistema nervioso del pez cebra

• Autor: Delfín Barandiarán, Brenda
• Formato: tesis de grado
• Fecha de Publicación: 2021
• Institución: Universidad Peruana Cayetano Heredia
• Repositorio: UPCH-Institucional
• Lenguaje: español
• OAI Identifier: oai:repositorio.upch.edu.pe:20.500.12866/9734
• Enlace del recurso: https://hdl.handle.net/20.500.12866/9734
• Nivel de acceso: acceso abierto
• Materia: Pez Cebra; Neurodegeneración; Proteína Priónica; Biología del Desarrollo; Morfolino; Inmunohistoquímica; Microscopía Confocal; Estudios Conductuales; https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#1.06.09; https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#1.06.12; https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#3.01.03

La proteína priónica (PrP) es patogénica cuando está anormalmente plegada, causando las llamadas “encefalopatías espongiformes transmisibles”. Además, la evidencia reciente indica que PrP media la muerte neuronal en el mal de Alzheimer. Sin embargo, se sabe muy poco sobre los complejos roles fisiológicos que cumple en su estado natural, haciendo necesario elucidar su contribución a los mecanismos moleculares que subyacen la neurodegeneración. Los embriones de pez cebra (Danio rerio) tienen muchas ventajas como modelo animal: su desarrollo es externo y rápido, son transparentes, se puede obtener muchos de ellos de una sola cruza y poseen alta homología genética y similitudes fisiológicas con humanos. El pez cebra expresa dos proteínas ortólogas de la PrP mamífera: PrP-1, mediando adhesión celular ubicuamente en blástula y gástrula, y PrP-2 que es más parecida a la proteína priónica de mamíferos tanto en su distribución subcelular como en su patrón de expresión en el sistema nervioso, pero de la que se conoce menos. Así, proponemos profundizar el estudio de los roles fisiológicos de la PrP a través del análisis funcional de PrP-2 en embriones de pez cebra. En este proyecto se aplicó dos enfoques experimentales para evaluar efectos a nivel celular y conductual de la disminución (“knockdown”) de PrP-2 inducida por la microinyección de oligonucleótidos antisentido de morfolinos en embriones tempranos: usando inmunohistoquímica y microscopía confocal, visualizamos estructuras neuroanatómicas afectadas en embriones de 24 y 48 horas post-fertilización, experimentos que fueron complementados con estudios conductuales en larvas de 5 y 7 días post-fertilización, dando un posible contexto fisiológico para los fenotipos hallados y sugiriendo nuevos enfoques. Nuestros resultados con ambas técnicas combinadas proporcionan información relevante del funcionamiento de la PrP en el desarrollo neural. En organismos tratados, observamos alteraciones importantes en gangliogénesis y axogénesis, posiblemente por una alterada comunicación celular mediada por PrP con proteínas como N-cadherina o NCAM. Además, se anotaron cambios en patrones de nado, consistente con alteraciones de estructuras o vías mediadas por neurotransmisores como GABA y glutamato. Finalmente, nuestro estudio aporta recomendaciones a tener en cuenta en el futuro para estudiar la función de la PrP.