Estudos comparativos da atividade cinética e trombina-símile de serinoproteases isoladas a partir dos venenos de Bothrops brazili e Bothrops roedingeri
Descripción del Articulo
En este estudio, se purificaron dos nuevas serinoproteasas con actividad trombina/similar, denominadas TLBbz y TLBro, a partir de las serpientes Bothrops brazili y Bothrops roedingeri, respectivamente. Ambas enzimas fueron aisladas mediante un solo paso cromatográfico de HPLC de fase reversa, manten...
| Autor: | |
|---|---|
| Formato: | tesis doctoral |
| Fecha de Publicación: | 2013 |
| Institución: | Superintendencia Nacional de Educación Superior Universitaria |
| Repositorio: | Registro Nacional de Trabajos conducentes a Grados y Títulos - RENATI |
| Lenguaje: | portugués |
| OAI Identifier: | oai:repositorio.sunedu.gob.pe:20.500.14366/5600 |
| Enlace del recurso: | https://hdl.handle.net/20.500.14366/5600 |
| Nivel de acceso: | acceso abierto |
| Materia: | Serinoprotease Bothrops roedingeri Bothrops brazili Cromatografía líquida de alta eficiencia Enzima trombina “like” veneno-purificación https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#1.06.00 |
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Estudos comparativos da atividade cinética e trombina-símile de serinoproteases isoladas a partir dos venenos de Bothrops brazili e Bothrops roedingeri Vilca Quispe, Augusto Serinoprotease Bothrops roedingeri Bothrops brazili Cromatografía líquida de alta eficiencia Enzima trombina “like” veneno-purificación https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#1.06.00 |
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En este estudio, se purificaron dos nuevas serinoproteasas con actividad trombina/similar, denominadas TLBbz y TLBro, a partir de las serpientes Bothrops brazili y Bothrops roedingeri, respectivamente. Ambas enzimas fueron aisladas mediante un solo paso cromatográfico de HPLC de fase reversa, manteniendo alta pureza y actividad biológica. Físico-químicamente, TLBbz mostró una masa molecular de 35,13 kDa y TLBro de 20,24 kDa por SDS/PAGE. Ambas serinoproteasas exhibieron actividad proteolítica frente al substrato cromogénico DL/BApNA y comportamiento michaeliano con valores de Vmax y KM específicos: TLBbz (Vmax = 1,89 nmoles p = 0,853 mM) y TLBro (Vmax = 0,0432 nmoles p-NA/Lt/min, KM = 0,039 mM). -NA/Lt/min, KM Ambas enzimas mostraron actividad óptima a 38ºC y pH 8,0, siendo inhibidas significativamente por fenilmetilsulfonil fluoride (PMSF) y otros inhibidores. La composición de aminoácidos reveló características ácidas y una buena proporción de aminoácidos hidrofóbicos, indicando estabilidad conformacional con posibles puentes bisulfito. Ambas TLBbz y TLBro hidrolizaron fibrinógeno bovino, actuando como trombina/similar tipo AB y tipo B respectivamente. Además, demostraron capacidad para inducir agregación plaquetaria, inhibida por PMSF. Estos resultados resaltan el potencial biomédico de TLBbz y TLBro, ofreciendo perspectivas para el desarrollo de fármacos que modulen la coagulación y otras aplicaciones terapéuticas. |
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Ambas serinoproteasas exhibieron actividad proteolítica frente al substrato cromogénico DL/BApNA y comportamiento michaeliano con valores de Vmax y KM específicos: TLBbz (Vmax = 1,89 nmoles p = 0,853 mM) y TLBro (Vmax = 0,0432 nmoles p-NA/Lt/min, KM = 0,039 mM). -NA/Lt/min, KM Ambas enzimas mostraron actividad óptima a 38ºC y pH 8,0, siendo inhibidas significativamente por fenilmetilsulfonil fluoride (PMSF) y otros inhibidores. La composición de aminoácidos reveló características ácidas y una buena proporción de aminoácidos hidrofóbicos, indicando estabilidad conformacional con posibles puentes bisulfito. Ambas TLBbz y TLBro hidrolizaron fibrinógeno bovino, actuando como trombina/similar tipo AB y tipo B respectivamente. Además, demostraron capacidad para inducir agregación plaquetaria, inhibida por PMSF. Estos resultados resaltan el potencial biomédico de TLBbz y TLBro, ofreciendo perspectivas para el desarrollo de fármacos que modulen la coagulación y otras aplicaciones terapéuticas.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)application/pdfporUniversidade Estadual de Campinas - UNICAMPBRCAPES-PROEX/Doutoradoinfo:eu-repo/semantics/openAccesshttps://creativecommons.org/licenses/by/4.0/deed.esSuperintendencia Nacional de Educación Superior Universitaria - SUNEDURegistro Nacional de Trabajos de Investigación - RENATIreponame:Registro Nacional de Trabajos conducentes a Grados y Títulos - RENATIinstname:Superintendencia Nacional de Educación Superior Universitariainstacron:SUNEDUSerinoproteaseBothrops roedingeriBothrops braziliCromatografía líquida de alta eficienciaEnzima trombina “like”veneno-purificaciónhttps://purl.org/pe-repo/ocde/ford#1.06.00Estudos comparativos da atividade cinética e trombina-símile de serinoproteases isoladas a partir dos venenos de Bothrops brazili e Bothrops roedingeriinfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisInstituto de Biología / Biología Funcional e MolecularUniversidade Estadual de Campinas - UNICAMPDoutor em Biologia Funcional e Molecular29589817Universidade Estadual de Campinas - UNICAMP. Instituto de Biología / Biología Funcional e MolecularMarangoni, SergioNovello, Jose CamiloSantos de Souza Galvão, Ana CarolinaGarrido Cavalcante, Walter LuisRocha, Thalitahttps://purl.org/pe-repo/renati/level#doctorhttps://purl.org/pe-repo/renati/type#tesisORIGINALVILCAQUISPE,A.pdfTrabajo de investigacionapplication/pdf2382971https://repositorio.sunedu.gob.pe/backend/api/core/bitstreams/1240566d-563c-4682-bb42-1ffd88400eba/download9abe7312a933484f4503ce2896145378MD51trueAnonymousREADAutorizacion.pdfAutorización de registroapplication/pdf267306https://repositorio.sunedu.gob.pe/backend/api/core/bitstreams/eabcb83b-3c1b-4868-b3dd-df6bec625f3f/downloade124cad9465fca7bdb6c684429528572MD52falseAnonymousREADLICENSElicense.txttext/plain956https://repositorio.sunedu.gob.pe/backend/api/core/bitstreams/2378fc0d-b1c7-4752-8d02-88802551abfb/downloadb39fb1e1cb23db8e93fd74de238cfcd9MD53falseAnonymousREADTEXTVILCAQUISPE,A.pdf.txtVILCAQUISPE,A.pdf.txtExtracted texttext/plain103233https://repositorio.sunedu.gob.pe/backend/api/core/bitstreams/54ffe44f-8714-465c-83c1-5e82d119fab0/download4769cebf028f1b0753894577461dc64eMD54falseAnonymousREADAutorizacion.pdf.txtAutorizacion.pdf.txtExtracted texttext/plain5707https://repositorio.sunedu.gob.pe/backend/api/core/bitstreams/0b2f7482-6940-4deb-a0b0-21fff3ed1b5a/download95c37d40956e39c953e162ef82ef56e8MD56falseAnonymousREADTHUMBNAILVILCAQUISPE,A.pdf.jpgVILCAQUISPE,A.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg13895https://repositorio.sunedu.gob.pe/backend/api/core/bitstreams/f1e80f87-59bc-45b5-8af6-4f4163635693/download2a1a6e92639e7aeb40d314997c941995MD55falseAnonymousREADAutorizacion.pdf.jpgAutorizacion.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg36158https://repositorio.sunedu.gob.pe/backend/api/core/bitstreams/bca343f2-a616-4001-8807-0c6a9267fefd/download9ba72f505c3537a519a17143baf3fc94MD57falseAnonymousREAD20.500.14366/5600oai:repositorio.sunedu.gob.pe:20.500.14366/56002026-02-25T08:14:43.348141Zhttps://creativecommons.org/licenses/by/4.0/deed.esinfo:eu-repo/semantics/openAccessopen.accesshttps://repositorio.sunedu.gob.peRepositorio de la Superintendencia Nacional de Educación Superiorrepositorio@sunedu.gob.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 |
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Nota importante:
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