Estudos comparativos da atividade cinética e trombina-símile de serinoproteases isoladas a partir dos venenos de Bothrops brazili e Bothrops roedingeri

• Autor: Vilca Quispe, Augusto
• Formato: tesis doctoral
• Fecha de Publicación: 2013
• Institución: Superintendencia Nacional de Educación Superior Universitaria
• Repositorio: Registro Nacional de Trabajos conducentes a Grados y Títulos - RENATI
• Lenguaje: portugués
• OAI Identifier: oai:repositorio.sunedu.gob.pe:20.500.14366/5600
• Enlace del recurso: https://hdl.handle.net/20.500.14366/5600
• Nivel de acceso: acceso abierto
• Materia: Serinoprotease; Bothrops roedingeri; Bothrops brazili; Cromatografía líquida de alta eficiencia; Enzima trombina “like”; veneno-purificación; https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#1.06.00

En este estudio, se purificaron dos nuevas serinoproteasas con actividad trombina/similar, denominadas TLBbz y TLBro, a partir de las serpientes Bothrops brazili y Bothrops roedingeri, respectivamente. Ambas enzimas fueron aisladas mediante un solo paso cromatográfico de HPLC de fase reversa, manteniendo alta pureza y actividad biológica. Físico-químicamente, TLBbz mostró una masa molecular de 35,13 kDa y TLBro de 20,24 kDa por SDS/PAGE. Ambas serinoproteasas exhibieron actividad proteolítica frente al substrato cromogénico DL/BApNA y comportamiento michaeliano con valores de Vmax y KM específicos: TLBbz (Vmax = 1,89 nmoles p = 0,853 mM) y TLBro (Vmax = 0,0432 nmoles p-NA/Lt/min, KM = 0,039 mM). -NA/Lt/min, KM Ambas enzimas mostraron actividad óptima a 38ºC y pH 8,0, siendo inhibidas significativamente por fenilmetilsulfonil fluoride (PMSF) y otros inhibidores. La composición de aminoácidos reveló características ácidas y una buena proporción de aminoácidos hidrofóbicos, indicando estabilidad conformacional con posibles puentes bisulfito. Ambas TLBbz y TLBro hidrolizaron fibrinógeno bovino, actuando como trombina/similar tipo AB y tipo B respectivamente. Además, demostraron capacidad para inducir agregación plaquetaria, inhibida por PMSF. Estos resultados resaltan el potencial biomédico de TLBbz y TLBro, ofreciendo perspectivas para el desarrollo de fármacos que modulen la coagulación y otras aplicaciones terapéuticas.