Determinantes estruturais para a especificidade de interação nas interfaces G e NC de septinas: validando as regras de substituição na montagem do filamento

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Descargue el texto completo en el repositorio institucional de la Universidade de São Paulo: https://doi.org/10.11606/T.76.2020.tde-17052021-091522
Detalles Bibliográficos
Autor: Leonardo Cabrejos, Diego Antonio
Formato: tesis doctoral
Fecha de Publicación:2020
Institución:Superintendencia Nacional de Educación Superior Universitaria
Repositorio:Registro Nacional de Trabajos conducentes a Grados y Títulos - RENATI
Lenguaje:portugués
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Biofísica
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Aquí, describimos los estudios realizados en las interfases G y NC de las septinas, con el fin de encontrar los mecanismos moleculares de interacción específicos y verificar el reemplazo de las septinas por otras del mismo grupo. Ocho combinaciones de heterocomplejos “G“ de septinas fueron estudiados usando técnicas biofísicas y estructurales. Los estudios cristalográficos de heterodímeros G permitieron identificar interacciones específicas que determinan la selectividad del complejo formado por septinas del grupo II y grupo III, ayudando también a explicar la presencia de un grupo catalíticamente inactivo en estas proteínas. Por otra parte, las estructuras cristalográficas de los coiled-coils de las septinas 1, 4 y 5 (Interfaz NC) nos permitieron observar un nuevo motivo proteico que sugiere estar relacionado con la interacción entre dos heterofilamentos, formando estructuras altamente complejas en las septinas.Septinas são proteínas envolvidas em diversos processos celulares (citocinese, espermatogênese, apoptose etc.), razão pela qual estão relacionadas com o desenvolvimento de várias doenças. Pertencentes à família das GTPases, apresentam três domínios: N e C terminal altamente variável e um domínio G (ligação a GTP/GDP) conservado. Para realizar suas funções, uma septina de cada grupo (4 grupos diferentes em humanos) se associa para formar heterofilamentos usando dois tipos de interfaces: a interface G e a interface NC. Embora seja conhecido o tipo de interface de contato e a ordem específica das septinas na montagem do filamento, os mecanismos moleculares que controlam a polimerização correta do filamento ainda são desconhecidos. Aqui, descrevemos os estudos realizados nas interfaces G e NC das septinas, a fim de encontrar os mecanismos moleculares de interação específica e verificar a substituição das septinas por outras do mesmo grupo. Oito combinações de heterocomplexos “G” de septinas foram co-expressas e purificadas para serem caracterizadas por técnicas biofísicas, apresentando heterodímeros homogêneos em solução (SEC e SEC-MALS) com presença de GTP e GDP em proporções aproximadamente equimolares. Além disso, cada dímero exibe uma estabilidade térmica diferente, o que pode indicar uma preferência de interação para a formação de complexos. Os estudos cristalográficos dos heterodímeros G permitiu identificar interações específicas que determinam a especificidade do complexo formado por septinas do grupo II e grupo III (validando a substituição de septinas do mesmo grupo), ajudando também a explicar a presença de um grupo catalíticamente inativo em estas proteínas. Por outro lado, as estruturas cristalográficas dos coiled-coils das septinas 1, 4 e 5 (Interface NC) permitiu observar um novo motivo proteico que sugere estar relacionado com a interação entre dois heterofilamentos, formando estruturas de alta complexidade em septinas (redes etc.).Brasil. Fundação do Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)application/pdfporUniversidade de São PauloBRinfo:eu-repo/semantics/openAccessSuperintendencia Nacional de Educación Superior Universitaria - SUNEDURegistro Nacional de Trabajos de Investigación - RENATIreponame:Registro Nacional de Trabajos conducentes a Grados y Títulos - RENATIinstname:Superintendencia Nacional de Educación Superior Universitariainstacron:SUNEDUSeptinasGTP FosfohidrolasasBiofísicahttps://purl.org/pe-repo/ocde/ford#1.03.01Determinantes estruturais para a especificidade de interação nas interfaces G e NC de septinas: validando as regras de substituição na montagem do filamentoDeterminantes estructurales para la especificidad de interacción en las interfaces G y NC de septinas: validando las reglas de sustitución en el montaje del filamentoinfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisUniversidade de São Paulo. Instituto de Física de São CarlosFísica con mención en Física Aplicada. Opción: Física BiomolecularDoctor en Cienciashttp://purl.org/pe-repo/renati/level#doctorhttps://orcid.org/0000-0002-2016-317947040981Garratt, Richard CharlesAmbrosio, Andre Luis BerteliFarah, Shaker ChuckFontes, Marcos Roberto de MattosGomes Guimarães, Beatrizhttp://purl.org/pe-repo/renati/type#tesisORIGINALLeonardoCabrejosDA.pdfLeonardoCabrejosDA.pdfTesis (abierta en repositorio de origen)application/pdf8031149https://renati.sunedu.gob.pe/bitstream/renati/3128/1/LeonardoCabrejosDA.pdf973937f6333a24d3605a9a1d0204f03aMD51Autorizacion.pdfAutorizacion.pdfAutorización del registroapplication/pdf294203https://renati.sunedu.gob.pe/bitstream/renati/3128/2/Autorizacion.pdf68093f999c50303be16d1fbfd272e187MD52LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-81748https://renati.sunedu.gob.pe/bitstream/renati/3128/3/license.txt8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33MD53TEXTLeonardoCabrejosDA.pdf.txtLeonardoCabrejosDA.pdf.txtExtracted texttext/plain234533https://renati.sunedu.gob.pe/bitstream/renati/3128/4/LeonardoCabrejosDA.pdf.txt638838c1e82f54e75b42ee36cd4e83fdMD54Autorizacion.pdf.txtAutorizacion.pdf.txtExtracted texttext/plain4339https://renati.sunedu.gob.pe/bitstream/renati/3128/6/Autorizacion.pdf.txt4a1f3c7be7dbce07b6381e694c73572bMD56THUMBNAILLeonardoCabrejosDA.pdf.jpgLeonardoCabrejosDA.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1209https://renati.sunedu.gob.pe/bitstream/renati/3128/5/LeonardoCabrejosDA.pdf.jpgf2ad3ad37f78eca5b5dec1dc9722cbd4MD55Autorizacion.pdf.jpgAutorizacion.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1645https://renati.sunedu.gob.pe/bitstream/renati/3128/7/Autorizacion.pdf.jpg6fb1dd15a9e4bb672199371c3516eb03MD57renati/3128oai:renati.sunedu.gob.pe:renati/31282022-12-14 03:14:16.051Registro Nacional de Trabajos de Investigaciónrenati@sunedu.gob.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