El objetivo de la presente investigación fue evaluar el efecto de la concentración de extracto de levadura y la relación carbono – nitrógeno en la producción de polihidroxibutirato por Bacillus subtillis NRRL B-1650. El medio de cultivo se elaboró a partir de un diseño de medio consecuente a las necesidades nutricionales del microorganismo que fue suplementado con extracto de levadura. También se determinó que la cepa producía PHB en la fase exponencial y esta alcanzaba su mayor productividad a las 48 horas. Se utilizo un diseño experimental compuesto rotable para estudiar el efecto de la concentración de extracto de levadura y la relación carbono/nitrógeno sobre la producción de PHB, determinándose de esta forma un valor óptimo de 3.63 g/L y 21.72 de cada una de las variables para dar un valor óptimo de 1.8 g/L de PHB.