DETERMINACIÓN DE LA EFICIENCIA DE SECRECIÓN DE UNA PROTEÍNA RECOMBINANTE EN LA LEVADURA S. CEREVISIAE MEDIANTE ANÁLISIS ELECTROFORÉTICO Y DETECCIÓN POR WESTERN BLOT
Descripción del Articulo
En este trabajo se determinaron los niveles de secreción conferidos por dos diferentes mecanismos en la levadura Saccharomyces cerevisiae, aplicados a la enzima glutatión S-transferasa (GST) y mediante ensayos de electroforesis y Western blot (o transferencia Western). Se construyeron previamente pl...
| Autores: | , |
|---|---|
| Formato: | artículo |
| Fecha de Publicación: | 2024 |
| Institución: | Sociedad Química del Perú |
| Repositorio: | Revista de la Sociedad Química del Perú |
| Lenguaje: | español |
| OAI Identifier: | oai:rsqp.revistas.sqperu.org.pe:article/434 |
| Enlace del recurso: | http://revistas.sqperu.org.pe/index.php/revistasqperu/article/view/434 |
| Nivel de acceso: | acceso abierto |
| Materia: | immunoblotting glutathione S- transferase (GST) yeast Saccharomyces cerevisiae secretion levels enzyme secretion alpha signal peptide synthetic signal peptide inmunoblotting glutatión S- transferasa (GST) levadura Saccharomyces cerevisiae niveles de secreción secreción enzimática péptido señal alfa péptido señal sintético |
| id |
REVSQP_9893715228a81181046ba9af018682fc |
|---|---|
| oai_identifier_str |
oai:rsqp.revistas.sqperu.org.pe:article/434 |
| network_acronym_str |
REVSQP |
| network_name_str |
Revista de la Sociedad Química del Perú |
| repository_id_str |
|
| spelling |
DETERMINACIÓN DE LA EFICIENCIA DE SECRECIÓN DE UNA PROTEÍNA RECOMBINANTE EN LA LEVADURA S. CEREVISIAE MEDIANTE ANÁLISIS ELECTROFORÉTICO Y DETECCIÓN POR WESTERN BLOTDETERMINATION OF THE SECRETION EFFICIENCY OF A RECOMBINANT PROTEIN IN THE YEAST S. CEREVISIAE BY ELECTROPHORETIC ANALYSIS AND WESTERN-BLOT DETECTIONKitazono Sugahara, Ana AkemiMansilla García, Sandy Nellyimmunoblottingglutathione S- transferase (GST)yeast Saccharomyces cerevisiaesecretion levelsenzyme secretionalpha signal peptidesynthetic signal peptideinmunoblottingglutatión S- transferasa (GST)levadura Saccharomyces cerevisiaeniveles de secreciónsecreción enzimáticapéptido señal alfapéptido señal sintéticoEn este trabajo se determinaron los niveles de secreción conferidos por dos diferentes mecanismos en la levadura Saccharomyces cerevisiae, aplicados a la enzima glutatión S-transferasa (GST) y mediante ensayos de electroforesis y Western blot (o transferencia Western). Se construyeron previamente plásmidos que permiten la producción de dos tipos de GST fusionadas con sendas secuencias que facilitan su secreción (péptidos de señal, PS): el PS-Alfa (derivado del factor de apareamiento alfa) y un PS-sintético (diseñado a partir de secuencias de consenso derivadas de proteínas que son eficientemente secretadas en la levadura). Después de la separación electroforética de las muestras de proteínas intracelulares y extracelulares, se realizó un ensayo de Western blot que permitió la detección específica de GST mediante un anticuerpo monoclonal. Los ensayos permitieron la identificación de varias formas de GST, en su forma procesada extracelular (26 kDa) y otras de mayor tamaño, siempre intracelulares, dependiendo del péptido señal (PS) utilizado. Sin embargo, no se observaron diferencias en los niveles extracelulares de GST, demostrando que con las condiciones aplicadas, ambos péptidos señal son similarmente eficientes en la promoción de la secreción de proteínas.The main goal of this work was to investigate the secretion levels that can be achieved when using two different mechanisms in the yeast Saccharomyces cerevisiae and the enzyme glutathione S-transferase (GST), and via electrophoresis and Western-blot assays. The respective plasmids were previously constructed, which allowed the production of the GST enzyme fused to two different secretion signals (signal peptides, SP): the alpha SP (derived from the alpha mating factor) and a synthetic SP (designed from consensus sequences derived from proteins that are known to be efficiently secreted in yeast). After the intracellular and extracellular protein fractions were separated by electrophoresis, a Western blot assay was performed using a monoclonal anti-GST antibody for the specific detection of the protein. These assays allowed the identification of several intracellular forms of GST with diverse sizes depending on the SP, but only the mature 26 kDa form was found in the extracellular fraction. However, no difference was observed on the extracellular levels of GST, which indicated that, under the applied conditions, both SPs are similarly efficient promoting protein secretion.Sociedad Química del Perú2024-09-30info:eu-repo/semantics/articleinfo:eu-repo/semantics/publishedVersiontexttextoapplication/pdfhttp://revistas.sqperu.org.pe/index.php/revistasqperu/article/view/43410.37761/rsqp.v89i3.434Revista de la Sociedad Química del Perú; Vol. 89 Núm. 3 (2023): Revista de la Sociedad Química del Perú; 1-10Journal of the Chemical Society of Peru; Vol. 89 No. 3 (2023): Revista de la Sociedad Química del Perú; 1-102309-87401810-634X10.37761/rsqp.v89i3reponame:Revista de la Sociedad Química del Perúinstname:Sociedad Química del Perúinstacron:SQPspahttp://revistas.sqperu.org.pe/index.php/revistasqperu/article/view/434/3662023https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/info:eu-repo/semantics/openAccessoai:rsqp.revistas.sqperu.org.pe:article/4342024-03-16T04:21:48Z |
| dc.title.none.fl_str_mv |
DETERMINACIÓN DE LA EFICIENCIA DE SECRECIÓN DE UNA PROTEÍNA RECOMBINANTE EN LA LEVADURA S. CEREVISIAE MEDIANTE ANÁLISIS ELECTROFORÉTICO Y DETECCIÓN POR WESTERN BLOT DETERMINATION OF THE SECRETION EFFICIENCY OF A RECOMBINANT PROTEIN IN THE YEAST S. CEREVISIAE BY ELECTROPHORETIC ANALYSIS AND WESTERN-BLOT DETECTION |
| title |
DETERMINACIÓN DE LA EFICIENCIA DE SECRECIÓN DE UNA PROTEÍNA RECOMBINANTE EN LA LEVADURA S. CEREVISIAE MEDIANTE ANÁLISIS ELECTROFORÉTICO Y DETECCIÓN POR WESTERN BLOT |
| spellingShingle |
DETERMINACIÓN DE LA EFICIENCIA DE SECRECIÓN DE UNA PROTEÍNA RECOMBINANTE EN LA LEVADURA S. CEREVISIAE MEDIANTE ANÁLISIS ELECTROFORÉTICO Y DETECCIÓN POR WESTERN BLOT Kitazono Sugahara, Ana Akemi immunoblotting glutathione S- transferase (GST) yeast Saccharomyces cerevisiae secretion levels enzyme secretion alpha signal peptide synthetic signal peptide inmunoblotting glutatión S- transferasa (GST) levadura Saccharomyces cerevisiae niveles de secreción secreción enzimática péptido señal alfa péptido señal sintético |
| title_short |
DETERMINACIÓN DE LA EFICIENCIA DE SECRECIÓN DE UNA PROTEÍNA RECOMBINANTE EN LA LEVADURA S. CEREVISIAE MEDIANTE ANÁLISIS ELECTROFORÉTICO Y DETECCIÓN POR WESTERN BLOT |
| title_full |
DETERMINACIÓN DE LA EFICIENCIA DE SECRECIÓN DE UNA PROTEÍNA RECOMBINANTE EN LA LEVADURA S. CEREVISIAE MEDIANTE ANÁLISIS ELECTROFORÉTICO Y DETECCIÓN POR WESTERN BLOT |
| title_fullStr |
DETERMINACIÓN DE LA EFICIENCIA DE SECRECIÓN DE UNA PROTEÍNA RECOMBINANTE EN LA LEVADURA S. CEREVISIAE MEDIANTE ANÁLISIS ELECTROFORÉTICO Y DETECCIÓN POR WESTERN BLOT |
| title_full_unstemmed |
DETERMINACIÓN DE LA EFICIENCIA DE SECRECIÓN DE UNA PROTEÍNA RECOMBINANTE EN LA LEVADURA S. CEREVISIAE MEDIANTE ANÁLISIS ELECTROFORÉTICO Y DETECCIÓN POR WESTERN BLOT |
| title_sort |
DETERMINACIÓN DE LA EFICIENCIA DE SECRECIÓN DE UNA PROTEÍNA RECOMBINANTE EN LA LEVADURA S. CEREVISIAE MEDIANTE ANÁLISIS ELECTROFORÉTICO Y DETECCIÓN POR WESTERN BLOT |
| dc.creator.none.fl_str_mv |
Kitazono Sugahara, Ana Akemi Mansilla García, Sandy Nelly |
| author |
Kitazono Sugahara, Ana Akemi |
| author_facet |
Kitazono Sugahara, Ana Akemi Mansilla García, Sandy Nelly |
| author_role |
author |
| author2 |
Mansilla García, Sandy Nelly |
| author2_role |
author |
| dc.subject.none.fl_str_mv |
immunoblotting glutathione S- transferase (GST) yeast Saccharomyces cerevisiae secretion levels enzyme secretion alpha signal peptide synthetic signal peptide inmunoblotting glutatión S- transferasa (GST) levadura Saccharomyces cerevisiae niveles de secreción secreción enzimática péptido señal alfa péptido señal sintético |
| topic |
immunoblotting glutathione S- transferase (GST) yeast Saccharomyces cerevisiae secretion levels enzyme secretion alpha signal peptide synthetic signal peptide inmunoblotting glutatión S- transferasa (GST) levadura Saccharomyces cerevisiae niveles de secreción secreción enzimática péptido señal alfa péptido señal sintético |
| description |
En este trabajo se determinaron los niveles de secreción conferidos por dos diferentes mecanismos en la levadura Saccharomyces cerevisiae, aplicados a la enzima glutatión S-transferasa (GST) y mediante ensayos de electroforesis y Western blot (o transferencia Western). Se construyeron previamente plásmidos que permiten la producción de dos tipos de GST fusionadas con sendas secuencias que facilitan su secreción (péptidos de señal, PS): el PS-Alfa (derivado del factor de apareamiento alfa) y un PS-sintético (diseñado a partir de secuencias de consenso derivadas de proteínas que son eficientemente secretadas en la levadura). Después de la separación electroforética de las muestras de proteínas intracelulares y extracelulares, se realizó un ensayo de Western blot que permitió la detección específica de GST mediante un anticuerpo monoclonal. Los ensayos permitieron la identificación de varias formas de GST, en su forma procesada extracelular (26 kDa) y otras de mayor tamaño, siempre intracelulares, dependiendo del péptido señal (PS) utilizado. Sin embargo, no se observaron diferencias en los niveles extracelulares de GST, demostrando que con las condiciones aplicadas, ambos péptidos señal son similarmente eficientes en la promoción de la secreción de proteínas. |
| publishDate |
2024 |
| dc.date.none.fl_str_mv |
2024-09-30 |
| dc.type.none.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/article info:eu-repo/semantics/publishedVersion text texto |
| format |
article |
| status_str |
publishedVersion |
| dc.identifier.none.fl_str_mv |
http://revistas.sqperu.org.pe/index.php/revistasqperu/article/view/434 10.37761/rsqp.v89i3.434 |
| url |
http://revistas.sqperu.org.pe/index.php/revistasqperu/article/view/434 |
| identifier_str_mv |
10.37761/rsqp.v89i3.434 |
| dc.language.none.fl_str_mv |
spa |
| language |
spa |
| dc.relation.none.fl_str_mv |
http://revistas.sqperu.org.pe/index.php/revistasqperu/article/view/434/366 |
| dc.rights.none.fl_str_mv |
https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/ info:eu-repo/semantics/openAccess |
| rights_invalid_str_mv |
https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/ |
| eu_rights_str_mv |
openAccess |
| dc.format.none.fl_str_mv |
application/pdf |
| dc.coverage.none.fl_str_mv |
2023 |
| dc.publisher.none.fl_str_mv |
Sociedad Química del Perú |
| publisher.none.fl_str_mv |
Sociedad Química del Perú |
| dc.source.none.fl_str_mv |
Revista de la Sociedad Química del Perú; Vol. 89 Núm. 3 (2023): Revista de la Sociedad Química del Perú; 1-10 Journal of the Chemical Society of Peru; Vol. 89 No. 3 (2023): Revista de la Sociedad Química del Perú; 1-10 2309-8740 1810-634X 10.37761/rsqp.v89i3 reponame:Revista de la Sociedad Química del Perú instname:Sociedad Química del Perú instacron:SQP |
| instname_str |
Sociedad Química del Perú |
| instacron_str |
SQP |
| institution |
SQP |
| reponame_str |
Revista de la Sociedad Química del Perú |
| collection |
Revista de la Sociedad Química del Perú |
| repository.name.fl_str_mv |
|
| repository.mail.fl_str_mv |
|
| _version_ |
1847874904408457216 |
| score |
13.088833 |
Nota importante:
La información contenida en este registro es de entera responsabilidad de la institución que gestiona el repositorio institucional donde esta contenido este documento o set de datos. El CONCYTEC no se hace responsable por los contenidos (publicaciones y/o datos) accesibles a través del Repositorio Nacional Digital de Ciencia, Tecnología e Innovación de Acceso Abierto (ALICIA).
La información contenida en este registro es de entera responsabilidad de la institución que gestiona el repositorio institucional donde esta contenido este documento o set de datos. El CONCYTEC no se hace responsable por los contenidos (publicaciones y/o datos) accesibles a través del Repositorio Nacional Digital de Ciencia, Tecnología e Innovación de Acceso Abierto (ALICIA).