DETERMINACIÓN DE LA EFICIENCIA DE SECRECIÓN DE UNA PROTEÍNA RECOMBINANTE EN LA LEVADURA S. CEREVISIAE MEDIANTE ANÁLISIS ELECTROFORÉTICO Y DETECCIÓN POR WESTERN BLOT - Kitazono Sugahara, Ana Akemi (2024)
En este trabajo se determinaron los niveles de secreción conferidos por dos diferentes mecanismos en la levadura Saccharomyces cerevisiae, aplicados a la enzima glutatión S-transferasa (GST) y mediante ensayos de electroforesis y Western blot (o transferencia Western). Se construyeron previamente plásmidos que permiten la producción de dos tipos de GST fusionadas con sendas secuencias que facilitan su secreción (péptidos de señal, PS): el PS-Alfa (derivado del factor de apareamiento alfa) y un PS-sintético (diseñado a partir de secuencias de consenso derivadas de proteínas que son eficientemente secretadas en la levadura). Después de la separación electroforética de las muestras de proteínas intracelulares y extracelulares, se realizó un ensayo de Western blot que permitió la detección específica de GST mediante un anticuerpo monoclonal. Los ensayos permitieron la identificación de varias formas de GST, en su forma procesada extracelular (26 kDa) y otras de mayor tamaño, siempre intracelulares, dependiendo del péptido señal (PS) utilizado. Sin embargo, no se observaron diferencias en los niveles extracelulares de GST, demostrando que con las condiciones aplicadas, ambos péptidos señal son similarmente eficientes en la promoción de la secreción de proteínas.