ACTIVACIÓN QUÍMICA DE OVOCITOS DE ALPACA VITRIFICADOS DESPUÉS DE LA MADURACIÓN in vitro.

• Autores: Ruiz B., Jaime, Landeo J., Leandra, Artica F., Marino, Ratto F., Marcelo, Correa S., Jorge
• Formato: artículo
• Fecha de Publicación: 2011
• Institución: Universidad Nacional Mayor de San Marcos
• Repositorio: Revista UNMSM - Revista de Investigaciones Veterinarias del Perú
• Lenguaje: español
• OAI Identifier: oai:ojs.csi.unmsm:article/258
• Enlace del recurso: https://revistasinvestigacion.unmsm.edu.pe/index.php/veterinaria/article/view/258
• Nivel de acceso: acceso abierto
• Materia: vitrificación; ovocitos; alpaca; partenogénesis; Vitrificación

Se evaluó la viabilidad posdescongelamiento de ovocitos de alpaca vitrificados luego de la maduración in vitro. Los ovocitos fueron recuperados de ovarios obtenidos en el camal Municipal de Huancavelica, Perú, madurados in vitro por 24-25 h en una cámara modular con 5% de O2, 5% de CO2 y 90% de N2 en medio TCM-199 suplementado con Piruvato de Na, HEPES, sulfato de gentamicina, FSH, estradiol 17-? y suero fetal bovino. Los ovocitos fueron separados de las células de la granulosa con hialuronidasa al 0.1% y distribuidos en tres tratamientos: T1 (n=107), ovocitos expuestos a las soluciones crioprotectoras y vitrificados; T2 (n=121), ovocitos expuestos a las soluciones crioprotectoras no vitrificados (control de toxicidad de los crioprotectantes); T3 (n=232), grupo control de ovocitos no expuestos a las soluciones vitrificantes. Los ovocitos fueron vitrificados en microgotas sobre un papel de aluminio flotando en nitrógeno líquido, utilizando una solución de equilibrio con 4% de etilenglicol y una solución de vitrificación con 35% de etilenglicol, 5% de polivinilpirrolidona y 0.4 M de trehalosa. Las microgotas vitrificadas se almacenaron en nitrógeno líquido y fueron descongeladas 1-4 después. Todos los ovocitos fueron cultivados en SOF-HEPES con 5 ? M de ionomicina de Ca por 4 min a temperatura ambiente y luego cultivados por 3 h en 6-DMAP a 38.5 °C en una atmósfera húmeda con 5% de O2, 5% de CO2 y 90% de N2. Luego se cultivaron por 8 d en medio SOF-IVC. Se encontró 58.4, 68.7 y 97.3% de ovocitos morfológicamente normales para T1, T2 y T3, respectivamente. Las tasas de segmentación fueron de 39.9, 49.5 y 62.3%, y las tasas de blastocistos fueron de 0, 0 y 9.2% para T1, T2 y T3, respectivamente. Los resultados demuestran que los ovocitos de alpaca pueden ser vitrificados con el método de superficie sólida y que son viables morfológicamente y fisiológicamente posdescongelamiento.
The aim of this study was to evaluate the viability of vitrified/thawed alpaca oocytesafter in vitro maturation. Alpaca oocytes were retrieved from ovaries obtained in theslaughterhouse of Huancavelica, Peru and matured in vitro for 24-25 h in a modularchamber with 5% O2, 5% CO2 and 90% N2 in TCM-199 medium supplemented with sodiumpyruvate, HEPES, gentamycin sulphate, FSH, estradiol 17-?and fetal calf serum. Then,oocytes were fully denuded of cumulus cells with 0.1% hyaluronidase and assigned tothree treatments: T1 (n=107), oocytes exposed to cryoprotectans and vitrified; T2 (n=121),oocytes exposed to cryoprotectans without vitrification; and T3 (n=232), control groupof oocytes not exposed to vitrification solutions. Alpaca oocytes were vitrified inmicrodrops on a precooled aluminum foil floating in liquid nitrogen, using an equilibriumsolution with 4% ethylene glycol and a vitrification solution with 35% ethylene glycol,5% polyvinyl-pyrrolidone and 0.4 M trehalose. The vitrified microdrops were stored inliquid nitrogen and were thawed 1-4 d later. All oocytes were cultured on SOF-HEPESwith 5 ?mM Ca ionomycin by 4 min at room temperature followed by 3 h incubation in 6-DMAP at 38.5 ºC in a 5% O2, 5% CO2 and 90% N2 in humidified atmosphere. Subsequently,were cultivated on mSOF medium during 8 days. The rates of oocytes survival were 58.4,68.7 and 97.3% in T1, T2 and T2 respectively. The rates of cleavage were 39.9, 49.5 and62.3% and rates of development to blastocysts were 0, 0 and 9.2% in T1, T2 and T3respectively. The results showed that alpaca oocytes were morphologically andphysiologically viable after vitrification by solid surface method.