Evaluación de la actividad inhibitoria de péptidos sintéticos seleccionados sobre PknG de Mycobacterium tuberculosis

• Autores: Bustillos Higuchi, Enrique Hideki, Vega Loayza, Estefany del Pilar Isabel
• Formato: tesis de grado
• Fecha de Publicación: 2023
• Institución: Universidad Peruana de Ciencias Aplicadas
• Repositorio: UPC-Institucional
• Lenguaje: español
• OAI Identifier: oai:repositorioacademico.upc.edu.pe:10757/667385
• Enlace del recurso: http://hdl.handle.net/10757/667385
• Nivel de acceso: acceso abierto
• Materia: Mycobacterium tuberculosis; PknG; GarA; AX20017; Péptidos sintéticos; Synthetic peptides; http://purl.org/pe-repo/ocde/ford#3.00.00; https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#3.01.00

Introducción: La identificación de nuevos blancos terapéuticos y compuestos antimicrobianos son claves en la lucha contra la tuberculosis resistente a drogas. PknG es un factor de virulencia de Mycobacterium tuberculosis asociado con la supervivencia intracelular y estado de latencia, el cual se considera una diana promisoria. Objetivos: Evaluar la actividad inhibitoria de péptidos sintéticos seleccionados para PknG a través de un ensayo de luminiscencia. Métodos: Las proteínas recombinantes PknG y GarA fueron expresadas y purificadas mediante cromatografía de afinidad. La reacción de fosforilación de PknG y su inhibición se evaluaron mediante un ensayo de luminiscencia. Para la estandarización de la reacción de fosforilación se evaluó la composición del buffer, el tipo de ion divalente como cofactor, y el tiempo de reacción. Como control de inhibición se utilizó la molécula AX20017. Se determinó el porcentaje de inhibición para los péptidos candidatos. Resultados: Se obtuvieron alícuotas de PknG y GarA a una concentración de 145 µM y 231 µM, respectivamente. La reacción de fosforilación fue estandarizada a 181.2 nM PknG, 7.7 µM GarA y 10 µM ATP, utilizando el buffer PR1 (25 mM HEPES pH 7.5, 100 mM NaCl, 1 mM DTT, 5 mM MgCl2). AX20017 reportó una IC50 de 6.71 µM. Seis de los péptidos seleccionados demostraron un porcentaje de inhibición superior al 30%. De estos, UPC_07, UPC_08 y UPC_09 mostraron valores cercanos a 39%. Conclusiones: Se estandarizó un ensayo de luminiscencia in vitro para evaluar la inhibición de la actividad quinasa de PknG sobre GarA. Tres péptidos mostraron porcentajes de inhibición superiores a 38%