Determinación de la expresión relativa del gen TgMYB2 de Tectona grandis bajo estrés de tensión y herida y transformación genética de Nicotiana tabacum con el vector de expresión pK7FWG2::35S::TgMYB2::GFP

• Autor: Fernando Manuel, Matias Hurtado
• Formato: tesis de grado
• Fecha de Publicación: 2018
• Institución: Universidad Nacional del Centro del Perú
• Repositorio: UNCP - Institucional
• Lenguaje: español
• OAI Identifier: oai:repositorio.uncp.edu.pe:20.500.12894/5078
• Enlace del recurso: http://hdl.handle.net/20.500.12894/5078
• Nivel de acceso: acceso abierto
• Materia: Tectona grandis; Nicotiana tabacum; Transformación genética; Gen TgMYB2

Tectona grandis L.f. es una especie tropical valiosa por su madera, con estudios genéticos escasos. Con los objetivos de cuantificar el nivel de expresión del gen TgMYB2 de teca sometida a estrés de tensión y herida, transformar genéticamente a Nicotiana tabacum con el vector de expresión pK7FWG2::TgMYB2::GFP y analizar bioinformáticamente el gen TgMYB2, se realizaron estudios moleculares en los laboratorios de Biotecnología Vegetal de la Universidad de São Paulo, Brasil y en el Instituto de Biotecnología e Ingeniería Genética de la UNCP. Se trabajó con 3 experimentos independientes, para cada uno se usó el diseño completamente al azar (DCA) con tres tratamientos y tres repeticiones. Para cuantificar la expresión se utilizó la técnica transcripción reversa de PCR semi-cuantitativa y el análisis estadístico mediante la prueba F de Fisher a un nivel de significancia de 95%, la transformación génica fue con Agrobacterium tumefansis linaje CV3101 conteniendo el vector pK7FWG2. Se realizó el análisis del factor de transcripción TgMYB2 mediante el modelamiento de la proteína, análisis filogenético y de alineamiento múltiple mediante los programas Modeller, PyMol. MEGA7, Bioedit respectivamente. Los resultados de la expresión relativa demostraron que la tensión por dos semanas aumentó los niveles de transcritos del gen TgMYB2 y los tratamientos de herida en hoja por dos semanas mostraron una mayor expresión del gen TgMYB2 respecto al control. Se logró construir el plásmido pK7FWG2::35S::TgMYB2::GFP y transformar genéticamente N. tabacum, pudiendo visualizar la expresión ectópica del gen GFP (ligado al TgMYB2) a lo largo de la raíz. El análisis computacional mostró que la proteína TgMYB2 esta conformada por nueve regiones alfa-hélice y cuatro dominios conservados. El análisis filogenético mostró que algunos genes de la especie Sesamun indicum poseen un número significativo de dominios compartidos con el gen TgMYB2 de T. grandis, por pertenecer a la orden Lamiales