Construcción de vectores mediante sistema gateway con genes procedentes de Tectona grandis Linn. f.

• Autor: Quispe Melgar, Harold Rusbelth
• Formato: tesis de grado
• Fecha de Publicación: 2016
• Institución: Universidad Nacional del Centro del Perú
• Repositorio: UNCP - Institucional
• Lenguaje: español
• OAI Identifier: oai:repositorio.uncp.edu.pe:20.500.12894/3482
• Enlace del recurso: http://hdl.handle.net/20.500.12894/3482
• Nivel de acceso: acceso abierto
• Materia: Construcción de vectores; genes TgMYB1 y TgMYB2; Gateway; Tectona grandis

El trabajo tuvo como objetivo clonar dos genes procedentes de Tectona grandis L.f. haciendo uso del sistema GATEWAY, así como la transformación de Nicotiana tabacum L. L. a fin de determinar las funciones de los genes en estudio; para ello se partió de una base de datos de 1502 genes diferencialmente expresos del tallo de un árbol de 60 años; la selección de los genes fue manual, éstos fueron denominados TgMYB1 y TgMYB2; para el análisis de las secuencias se utilizaron los programas BLASTX, EXPASY, Pfam y ORF, asimismo para realizar los análisis filogenéticos y predecir la función de los genes seleccionados se utilizó la Base de Datos de Factores de Transcripción (FACTOR TRANSCRIPTION DATABASE) y el programa MEGA6 con el método de Maximum Likelihood y bootstrap igual a 10000. Se utilizaron los vectores pJET, pENTR y PK7FWG2; todas las construcciones y transformaciones fueron confirmadas mediante PCR y secuenciamiento. Para la transformación de Nicotiana tabacum L. L. se utilizó el linaje GV3101 de Agrobacterium tumefaciens, con los genes TgMYB1 y TgMYB2 en el vector PK7FWG2; posteriormente se realizó la evaluación de regeneración de las plantas a las 3 semanas, se obtuvo un 65,3% de regeneración de plantas transformadas con el gen TgMYB1 y 92,6% con el gen TgMYB2; finalmente el análisis filogenético para el gen TgMYB1 muestra que éste tiene mayor similitud con un gen MYB procedente de Mimulus guttatus y Vitis vinífera, y el TgMYB2 con Mimulus guttatus, Utricularia gibba, Populus trichocarpa, Eucalyptus grandis, Nicotiana tabacum L. L., Vitis vinífera y Arabidopsis thaliana.