Identificación de genes de biosíntesis de alginatos en Macrocystis pyrifera, Macrocystis integrifolia (Laminariales) y Sargassum sp (Fucales)

• Autor: Amaya Chuyes, Ana Belén
• Formato: tesis de grado
• Fecha de Publicación: 2019
• Institución: Universidad Nacional de Piura
• Repositorio: UNP-Institucional
• Lenguaje: español
• OAI Identifier: oai:repositorio.unp.edu.pe:UNP/2037
• Enlace del recurso: https://repositorio.unp.edu.pe/handle/UNP/2037
• Nivel de acceso: acceso abierto
• Materia: Secuenciamiento; Alginato; Cebadores; Alga parda; Biosíntesis; Ciencias Naturales

El estudio se llevó a cabo en Lima-Perú, con muestras biológicas de los países: Perú, Chile y Ecuador, donde se colectó Macrocystis pyrifera, Macrocystis integrifolia (Laminariales) y Sargassum sp. (Fucales). Se analizó y estandarizó el protocolo de extracción CTAB reportado por Doyle&Doyle 1990, la cantidad y calidad de ADN fue medido por espectrofotometría, mientras que la integridad se observó a través de electroforesis al 1% en gel de agarosa, para identificar genes de biosíntesis de alginato se realizaron búsquedas de secuencias homólogas de dichos genes (algC, algD y algG), los cebadores se diseñaron a partir de secuencias de Ectocarpus siliculosus, Laminaria digitata y Saccharina japonica, se utilizó la técnica de reacción en cadena de polimerasa (PCR) para la identificación de los genes algC, algD y algG utilizando el ADN molde de Macrocystis pyrifera, Macrocystis integrifolia y Sargassum sp, los productos de PCR obtenidos fueron secuenciados en los laboratorios de Macrogen (Seúl, Corea), editados y analizados con ayuda del programa bioinformático BIOEDIT. Finalmente se extrajo alginato de sodio a partir de frondas de Macrocystis pyrifera, Macrocystis integrifolia y Sargassum sp. La ruta de biosíntesis de alginato ha sido estudiada en Ectocarpus siliculosus, Laminaria digitata y Saccharina japónica donde se encontró que los genes algC, algD y algG están involucrados en la biosíntesis del alginato, codificando las enzimas: Phosphomanomutasa (PMM), GDP-manosa-deshidrogenasa (GMD) y Manurano-C5-epimerasa (MC5E) respectivamente. A través de PCR convencional se deemostró que Macrocystis pyrifera, Macrocystis integrifolia comparten los genes algC, algD y algG, estos genes están involucrados en la biosíntesis del alginato, pero no se obtuvo producto de PCR en Sargassum sp., sin embargo se demostró fenotípicamente que Sargassum sp., Macrocystis pyrifera y Macrocystis integrifolia sintetizan alginato de Sodio.