Producción de ADN polimerasa I ‘Bsu’ y la proteína de unión a hebra simple ‘gp32’ como componentes para una reacción de amplificación isotérmica RPA

• Autor: Mascaro Rivera, Lucero Nancy
• Formato: tesis de grado
• Fecha de Publicación: 2023
• Institución: Universidad Peruana Cayetano Heredia
• Repositorio: UPCH-Institucional
• Lenguaje: español
• OAI Identifier: oai:repositorio.upch.edu.pe:20.500.12866/14189
• Enlace del recurso: https://hdl.handle.net/20.500.12866/14189
• Nivel de acceso: acceso abierto
• Materia: ADN Polimerasa Bsu; gp32; Producción Enzimas Recombinantes; Polimerización; Unión Hebra Simple; https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#1.06.00; https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#1.06.03

Las técnicas de amplificación de ácidos nucleicos, como la PCR (reacción en cadena de la polimerasa), detectan el material genético de microorganismos. Tienen un rol crucial para el avance de la biología molecular, diagnóstico y estudio de agentes infecciosos. Al afianzarlas, los estudios epidemiológicos locales y nacionales conducirán al desarrollo de estrategias de salud pública. La pandemia del COVID-19 ha demostrado la importancia de potenciar la producción local de técnicas de bajo costo e implementarlas en zonas de difícil acceso y bajos recursos. Las reacciones isotérmicas son alternativas que podrían cubrir esas necesidades locales, entre ellas está la reacción RPA (recombinase polymerase amplification). El RPA es más rápido, menos costoso y requiere de equipamiento más sencillo en comparación con el PCR. El objetivo de este estudio fue producir dos proteínas recombinantes que forman parte del RPA, la ADN polimerasa Bsu y la gp32; y evaluar la actividad de cada proteína de forma independiente. Se evaluaron las condiciones de tiempo y temperatura para inducción, después se purificaron por cromatografía de afinidad a níquel. Se produjo 1.13 mg de polimerasa Bsu y 32 mg de gp32. La producción de la polimerasa no arrastró inhibidores de RPA y la actividad fue de 4.92 U/uL, cercano a la actividad de la polimerasa Bsu comercializada (5 U/uL). Se midió la unión a ADN hebra simple de la gp32 como la disminución de fluorescencia intrínseca de la proteína. La gp32 producida tuvo una actividad ~93% similar a la distribuida comercialmente.