Amplificación isotérmica mediada por bucle para la detección colorimétrica de blancos multicopias de Plasmodium vivax y Plasmodium falciparum

• Autor: Nolasco Cardenas, Oscar Patricio
• Formato: tesis doctoral
• Fecha de Publicación: 2022
• Institución: Universidad Peruana Cayetano Heredia
• Repositorio: UPCH-Institucional
• Lenguaje: español
• OAI Identifier: oai:repositorio.upch.edu.pe:20.500.12866/13456
• Enlace del recurso: https://hdl.handle.net/20.500.12866/13456
• Nivel de acceso: acceso abierto
• Materia: Malaria; LAMP; Diagnóstico Molecular; Amplificacion Isotermica; https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#1.06.01; https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#3.03.06; https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#3.03.07; https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#3.03.08

El diagnóstico temprano y especifico es uno de los principales objetivos en las estrategias para el control de la malaria. El presente estudio evalúa la tecnología de amplificación isotérmica mediada por bucle (LAMP del inglés Loop-mediated isothermal amplification), validando un sistema comercial y desarrollando un sistema LAMP colorimétrico “in house” empleando secuencias de genes multicopia para la detección de Plasmodium vivax y de Plasmodium falciparum mediante la visualización directa del cambio de coloración del indicador rojo neutro de amarillo a fucsia en las reacciones positivas. Los límites de detección (LOD del inglés Limit of detection) de las pruebas desarrolladas se estimaron entre 2.4 y 3.7 parásitos/μl de sangre. El mejor desempeño para la detección de P. vivax, fue obtenido con el blanco de amplificación COX1, mientras que el diseño con el blanco de amplificación Pfr364 fue el más específico para la detección de P. falciparum. En el diagnóstico para P. vivax y P. falciparum, los resultados empleando sangre entera indican que el LAMP colorimétrico “in house” puede detectar entre el 36,6 y 80.2 % de infecciones submicroscópicas. La máxima capacidad de detección se logró empleando ADN purificado con filtros de sílice; sin embargo, una preparación rápida de la muestra (Hervido y Centrifugado), mostro resultados tan confiables como los obtenidos por microscopía en muestras de sangre entera o sangre impregnada en papel filtro.