DISEÑO DE PLÁSMIDOS PARA LA EXPRESIÓN DEL CYND EN ARABIDOPSIS THALIANA VÍA AGROBACTERIUM TUMEFACIENS

• Autores: Montero, Miguel, Cuba, Andrea, Canal, Bryan, De los Ríos, Claudia, Pineda, Roberto
• Formato: artículo
• Fecha de Publicación: 2017
• Institución: Universidad Ricardo Palma
• Repositorio: Revista URP - Biotempo
• Lenguaje: español
• OAI Identifier: oai:oai.revistas.urp.edu.pe:article/1320
• Enlace del recurso: http://revistas.urp.edu.pe/index.php/Biotempo/article/view/1320
• Nivel de acceso: acceso abierto
• Materia: Agrobacterium tumefaciens; Cianuro; CynD; transformación genética

El cianuro, usado por las industrias mineras, es un compuesto tóxico que afecta principalmente a la metaloenzima c oxidasa en los seres vivos, enzima esencial para la respiración celular; por lo que la inhibición de esta enzima bloquea la fosforilación oxidativa, provocando la muerte celular. Ante ello, métodos biológicos como la fi torremediación proporcionan una alternativa para reducir o degradar contaminantes como el cianuro; sin embargo, esta técnica requeriría plantas que toleren altas concentraciones del metal en el suelo. Por otro lado, algunos microorganismos tienen una alta capacidad de desintoxicación de cianuro debido a una serie de vías metabólicas, como es el caso del Bacillus pumilus Meyer and Gottheil 1901, que presenta la cianidasa CynD que permite la degradación del cianuro a ácido fórmico y amonio. Por ello, el presente trabajo tiene como objetivo el diseño de plásmidos para la expresión de CynD en una planta modelo como la Arabidopsis thaliana (L.), Heynh. vía Agrobacterium tumefaciens (Smith & Townsend, 1907) Conn, 1942 con el fin de sentar las bases para evaluar si el CynD de B. pumilus le podría conferir a las plantas la facultad de crecer en presencia de cianuro y ayudar a su degradación. Para lo cual, se hizo uso de herramientas de la bioinformática, logrando diseñar un vector de clonación (pUCCynD), insertando in silico la secuencia del CynD en el polilinker del plásmido pUC18, entre las enzimas EcoRi (5’GAATTC - 3’CTTAAG) y BamHi (5’GGATCC-3’CCTAGG) del sitio múltiple de restricción y también un vector de transformación (pBCynD), insertando in silico la secuencia del CynD en el polilinker del plásmido pBI121, entre las enzimas ScaI (5’GAGCTC - 3’CTCGAG) y BamHI (5’GGATCC - 3’CCTAGG).
Cyanide, used by the mining industries, is a toxic compound which mainly aff ects c-oxidase metalloenzyme in living beings, an essential enzyme for cellular respiration. Th e inhibition of this enzyme blocks oxidative phosphorylation, causing cell death. Biological methods such as phytoremediation provide an alternative to reduce or degrade contaminants such as cyanide. However, this technique would require plants that tolerate high concentrations of the metal present in the soil. On the other hand, some microorganisms have a high capacity of cyanide detoxifi cation due to many metabolic pathways they have, such as Bacillus pumilus Meyer and Gottheil 1901, which presents the cyanid CynD that allows the degradation of cyanide formic acid and ammonium. Th e aim of this research was to design plasmids for the CynD expression in a model plant such as Arabidopsis thaliana (L.), Heynh. via Agrobacterium tumefaciens (Smith & Townsend, 1907) Conn, 1942 to lay the foundations to evaluate if the CynD of B. pumilus could confer to the plants the ability to grow in the presence of cyanide and assist in its degradation. For this purpose, bioinformatic tools were used to design a cloning vector (pUCCynD), inserting in silico the CynD sequence in the polylinker of the plasmid pUC18, among the EcoRi (5’GAATTC - 3’CTTAAG) and BamHi (5’GGATCC-3’CCTAGG) enzymes; and a transformation vector (pBCynD), inserting in silico the CynD sequence into the polylinker of the plasmid pBI121, among the ScaI (5’GAGCTC-3 ‘CTCGAG) and BamHI (5’GGATCC-3’CCTAGG) enzymes.