El presente trabajo tuvo como finalidad evaluar la interacción in vivo, mediante ensayos de pull-down, de la proteína de Werner (WRN), con los ARNm totales, ambos aislados de células HeLa. Los dominios N-terminal, ATPasa y DEAD, de la proteína WRN fueron clonados utilizando el sistema de expresión de E. coli y luego purificados mediante cromatografía de afinidad a Glutationa Sefarosa con los cuales se realizaron ensayos EMSA (ensayo de cambio de movilidad electroforética) y RT-qPCR para esclarecer que dominios de la proteína de WRN podrían estar involucrados en la formación de complejos de unión al ARNm. Mediante ensayos de pull-down con Oligo(dT) conjugado a esferas magnéticas se determinó que la proteína de Werner era capaz de interactuar con los ARNm in vivo. Para el control de la interacción de proteínas con los ARNm se utilizaron las proteínas NXF1 y CBP80, evidenci...

Background The Werner syndrome protein (WRN) belongs to the RecQ family of helicases and its loss of function results in the premature aging disease Werner syndrome (WS). We previously demonstrated that an early cellular change induced by WRN depletion is a posttranscriptional decrease in the levels of enzymes involved in metabolic pathways that control macromolecular synthesis and protect from oxidative stress. This metabolic shift is tolerated by normal cells but causes mitochondria dysfunction and acute oxidative stress in rapidly growing cancer cells, thereby suppressing their proliferation. Results To identify the mechanism underlying this metabolic shift, we examined global protein synthesis and mRNA nucleocytoplasmic distribution after WRN knockdown. We determined that WRN depletion in HeLa cells attenuates global protein synthesis without affecting the level of key components of ...