Expresión recombinante en Pichia pastoris del homólogo de PLA2 miotóxico BaMtx y la serinoproteinasa procoagulante barnetobina

Descripción del Articulo

Analiza la obtención de la versión recombinante de ambas toxinas en la levadura Pichia pastoris por las ventajas que ofrece como las modificaciones postraduccionales y la formación de enlaces puentes disulfuro. El estudio inicia con la obtención del ARN (25 ± 55 ng/100 µ L)b la síntesis de ADN (1.6...

Descripción completa

Detalles Bibliográficos
Autor: Torrejón Maldonado, Daniel Alcibiades
Formato: tesis de maestría
Fecha de Publicación:2023
Institución:Universidad Nacional Mayor de San Marcos
Repositorio:UNMSM-Tesis
Lenguaje:español
OAI Identifier:oai:cybertesis.unmsm.edu.pe:20.500.12672/20733
Enlace del recurso:https://hdl.handle.net/20.500.12672/20733
Nivel de acceso:acceso abierto
Materia:Pichia pastoris
Biología molecular
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description Analiza la obtención de la versión recombinante de ambas toxinas en la levadura Pichia pastoris por las ventajas que ofrece como las modificaciones postraduccionales y la formación de enlaces puentes disulfuro. El estudio inicia con la obtención del ARN (25 ± 55 ng/100 µ L)b la síntesis de ADN (1.6 a 4.8 ng ADN/ng ARN) y la posterior amplificación por PCR (reacción en cadena de polimerasa). Los amplicones fueron clonados en el vector pCR2.1cTOPO en células de Escherichia coli TOP10. La secuenciación confirma la obtención de Barnetobina y BaMtx junto con dos nuevas secuencias codificantes, BATXPLA3 (otra miotoxina de B. atrox) y BbtcSVSP2 (otra serinoproteinasa de B. barnetti). Se logra la subclonacion de Barnetobina y BaMtx en los vectores de expresión PICZac (que incluye una cola de polichistidina y un gen de resistencia al antibi7tico zeocina) y pPIC9 (con un gen de HIS4 como marcado de seleccion por auxotrof2a) respectivamente.
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La secuenciación confirma la obtención de Barnetobina y BaMtx junto con dos nuevas secuencias codificantes, BATXPLA3 (otra miotoxina de B. atrox) y BbtcSVSP2 (otra serinoproteinasa de B. barnetti). Se logra la subclonacion de Barnetobina y BaMtx en los vectores de expresión PICZac (que incluye una cola de polichistidina y un gen de resistencia al antibi7tico zeocina) y pPIC9 (con un gen de HIS4 como marcado de seleccion por auxotrof2a) respectivamente.Fondo Nacional de Desarrollo Científico, Tecnológico y de Innovación Tecnológica (FONDECYT) y Contrato N° 079-2021- FONDECYT y el Vicerrectorado de Investigación y Posgrado de la UNMSM: PCONFIGI N° B22100141 y Programa de proyectos interdisciplinarios para el fomento de la cooperación interinstitucional en investigación e innovación B211007i. 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Unidad de PosgradoBiología Molecular41951131https://orcid.org/0000-0003-4417-202676450835511027Yarlequé Chocas, ArmandoMarín Sánchez, ObertWoll Toso, Patricia Gloriahttps://purl.org/pe-repo/renati/level#maestrohttps://purl.org/pe-repo/renati/type#tesis076495614486225910587728ORIGINALTorrejon_md.pdfTorrejon_md.pdfapplication/pdf7971043https://cybertesis.unmsm.edu.pe/bitstreams/d90e30f2-fb19-4eba-8518-fe49729c9efc/downloaddc489ec6abc6c918a58799c444492e2aMD51C1680_2023_Torrejon_md_autorizacion.pdfapplication/pdf0https://cybertesis.unmsm.edu.pe/bitstreams/23bdadd3-9f1a-4bec-8607-0019e0a2f179/downloadd41d8cd98f00b204e9800998ecf8427eMD57C1680_2023_Torrejon_md_reporte.pdfapplication/pdf0https://cybertesis.unmsm.edu.pe/bitstreams/62f0b9aa-e751-476a-88ca-b459aac4f985/downloadd41d8cd98f00b204e9800998ecf8427eMD58TEXTTorrejon_md.pdf.txtTorrejon_md.pdf.txtExtracted texttext/plain100629https://cybertesis.unmsm.edu.pe/bitstreams/d75cb69a-d28c-4d6e-ac36-fbd26db26cf8/downloada83781758e45817710096657574c7839MD55THUMBNAILTorrejon_md.pdf.jpgTorrejon_md.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg15335https://cybertesis.unmsm.edu.pe/bitstreams/f388129b-3225-44a7-af10-a73beb63a3c6/downloadde18b8c367cdfc17b09270ba04e166deMD56LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-81748https://cybertesis.unmsm.edu.pe/bitstreams/9b0ae277-3efa-4297-8886-1fcf2fd43170/download8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33MD5220.500.12672/20733oai:cybertesis.unmsm.edu.pe:20.500.12672/207332024-08-22 14:22:04.726https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/info:eu-repo/semantics/openAccessopen.accesshttps://cybertesis.unmsm.edu.peCybertesis UNMSMcybertesis@unmsm.edu.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