Estudio piloto: evaluación de las variantes de preparación del medio de cultivo 7H9-OADC para el crecimiento de Mycobacterium tuberculosis usadas en la prueba MODS

• Autor: Rodriguez Puma, Joseline
• Formato: tesis de maestría
• Fecha de Publicación: 2022
• Institución: Universidad Peruana Cayetano Heredia
• Repositorio: UPCH-Institucional
• Lenguaje: español
• OAI Identifier: oai:repositorio.upch.edu.pe:20.500.12866/11617
• Enlace del recurso: https://hdl.handle.net/20.500.12866/11617
• Nivel de acceso: acceso abierto
• Materia: MODS; Tuberculosis; Medios Alternativos; Liofilización; Irradiación; https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#1.06.01; https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#3.01.05; https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#3.02.07; https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#3.03.08

La tuberculosis es una enfermedad que se encuentra entre las diez principales causas de muerte en todo el mundo según los últimos informes otorgados por la Organización Mundial de la Salud (OMS), motivo por el cual se han implementado diversos métodos de diagnóstico, entre ellos encontramos las pruebas moleculares que presentan ventajas como la automatización, un tiempo corto de respuesta, alta sensibilidad y especificidad; sin embargo, son muy costosas. También se cuenta con pruebas económicas como la baciloscopia que se basa en la observación directa del bacilo de Koch en un microscopio, pero con una sensibilidad muy baja (40% - 70%) o cultivos usando el medio Löwenstein-Jensen u Ogawa, siguen siendo una opción de bajo costo, pero con tiempos de respuesta más prolongados (≥ 24 días). La prueba de Susceptibilidad de Drogas de Observación Microscópica, MODS por las siglas en inglés, que utiliza el medio líquido Middleebrook 7H9 enriquecido con OADC (suplemento compuesto por ácido oleico, albumina, dextrosa y catalasa), casitona y glicerol (7H9-OADC) y el suplemento antimicrobiano PANTA, presenta una alta sensibilidad y especificidad. El MODS se basa en la detección del crecimiento característico de Mycobacterium tuberculosis (MTB), que a su vez evalúa la susceptibilidad a isoniacida y rifampicina en un corto tiempo, es de bajo costo e ideal para su implementación en países en desarrollo. Sin embargo, este método requiere insumos variados y personal altamente entrenado que garantice la correcta preparación del medio de cultivo siendo una limitante de su uso de manera extensiva. En la presente propuesta se evaluaron variantes del medio de cultivo 7H9-OADC (medios alternativos) que solo requieren la adición de agua estéril para usarlos. Los medios alternativos fueron: Medios mezclados, preparados mezclando los componentes del medio en polvo (sin esterilización); y medios liofilizados, preparados mediante liofilización del medio líquido estéril 7H9-OADC. Con el objetivo de tener un medio mínimo que asegure el crecimiento de MTB manteniendo la esterilidad del medio se evaluaron la catalasa (solo en el medio mezclado), el PANTA y la irradiación gamma, generando un total de 10 condiciones (variaciones de los medios mezclados y liofilizados). Los medios con mejores resultados fueron seleccionados y evaluados con muestras de esputo con baciloscopia positiva. El crecimiento bacteriano se determinó por número de microcolonias y porcentaje de crecimiento del aislado de MTB y por porcentaje de crecimiento en las muestras de esputo. El análisis con el aislado de MTB mostró que la adición de catalasa promueve el crecimiento de MTB independientemente del tipo de medio (p=0,006); la radiación gamma no afecta el crecimiento de MTB (p=1) y la presencia del PANTA reduce el crecimiento de MTB de forma significativa en los medios liofilizados irradiados (p<0.05). 26 muestras de esputo fueron positivas en todos los medios con una mediana de días de positividad de 6 ± 3 días con un rango de 4 a 14 días. No se observaron diferencias significativas (p=0,47) en el porcentaje de crecimiento entre el medio 7H9-OADC (100%), medio mezclado (95%) y medio liofilizado (100%). En conclusión, los resultados preliminares muestran que las presentaciones de los medios alternativos tienen un rendimiento similar al medio MODS estándar.