Desarrollo y validación de una prueba rápida en formato Lateral Flow Assay (LFA) para el serodiagnóstico de leishmaniasis cutánea

• Autor: Huaihua Puma, Percy
• Formato: tesis de maestría
• Fecha de Publicación: 2025
• Institución: Universidad Peruana Cayetano Heredia
• Repositorio: UPCH-Institucional
• Lenguaje: español
• OAI Identifier: oai:repositorio.upch.edu.pe:20.500.12866/17791
• Enlace del recurso: https://hdl.handle.net/20.500.12866/17791
• Nivel de acceso: acceso embargado
• Materia: Leishmaniasis Cutánea; Oligopéptidos Sintéticos; Lateral Flow Assay; https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#1.06.03; https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#3.03.08

En el Perú, la leishmaniasis cutánea (LC) es un problema de salud pública que afecta predominantemente a la población rural socioeconómicamente deprimida.El diagnóstico convencional para esta enfermedad incluye los métodos parasitológico, serológico y molecular, cada uno de los cuales presenta algunas limitaciones. Considerando que el diagnóstico temprano permite un tratamiento oportuno, existe la necesidad de una prueba simple, rápida y precisa con alta sensibilidad y especificidad, que pueda usarse como una alternativa apropiada y aplicable para el diagnóstico de la leishmaniasis cutánea en áreas endémicas con limitado acceso a los servicios de salud. En este estudio se desarrolló y validó una prueba rápida en formato Lateral Flow Assay (LFA) para el serodiagnóstico de leishmaniasis cutánea, que emplea independientemente Antígeno Total Soluble de Leishmania “ATSL” y los oligopéptidos sintéticos opH2A y opLiP2a. En el desarrollo de la prueba rápida; se utilizó un enfoque de unión del oligopéptido biotinilado a estreptavidina como proteína de anclaje que se une a la nitrocelulosa, también se consideró el pH y diferentes matrices sólidas de nitrocelulosa(FF080HP, FF120HP y FF170HP de Whatman/GE). La señal visible se probó con HRP-DAB, nanopartículas de oro coloidal y nanoshell de oro. Las condiciones óptimas se obtuvieron utilizando la membrana de nitrocelulosa FF120HP, con una concentración de 200 μg/mL de estreptavidina y 50 μg/mL de opH2A u opLiP2a;así mismo este ensayo presentó una mejor sensibilidad de detección con nanoshell de oro. En el caso del antígeno total (ATSL) se estableció a una concentración de500 μg/mL en la matriz FF120HP en oro coloidal. Estas condiciones en conjunto para los antígenos (opH2A, opLiP2a y ATSL) aplicadas a la tira LFA, brindaron un resultado a los 40 minutos. En la validación de la prueba LFA, el análisis de la puntuación visual de los antígenos evaluados, mostró un mejor perfil de diagnóstico el oligopéptido opLiP2a que reflejó una sensibilidad de 62.0% y especificidad de 94.6% a comparación del opH2a que tiene una sensibilidad de36.0% y especificidad de 93.5%, e incluso fue mejor que el antígeno total (ATSL)que tiene una sensibilidad de 56.0% y una especificidad de 90.2%; este análisis se confirma cuando se mide por intensidad relativa - porcentaje de positividad. Finalmente, las características diagnosticas de los oligopéptidos (opLiP2a yopH2A) de la prueba LFA son similares a la prueba de ELISA que utiliza los mismos antígenos, corroborando con la prueba de Kappa que dio un acuerdo sustancial entre LFA y ELISA.