Efecto in vitro del Extracto Proteico de Macroquistes de Sarcocytis aucheniae sobre la Viabilidad y Degranulación de Leucocitos de Conejo (Oryctologus cuniculus)

• Autores: Inga, María del Carmen, Manchego S., Alberto, Sandoval C., Nieves, Burga C., Cesar, Castro S., Gina, Rivera G., Hermelinda
• Formato: artículo
• Fecha de Publicación: 2016
• Institución: Universidad Nacional Mayor de San Marcos
• Repositorio: Revista UNMSM - Revista de Investigaciones Veterinarias del Perú
• Lenguaje: español
• OAI Identifier: oai:ojs.csi.unmsm:article/11644
• Enlace del recurso: https://revistasinvestigacion.unmsm.edu.pe/index.php/veterinaria/article/view/11644
• Nivel de acceso: acceso abierto
• Materia: Sarcocystis aucheniae; myeloperoxidase; glucosaminidase; leukocyte; rabbit; mieloperoxidasa; glucosaminidasa; leucocito; conejo

En el presente trabajo se buscó determinar el efecto tóxico in vitro del extracto proteico de macroquistes de Sarcocystis aucheniae sobre leucocitos circulantes de conejo (citotoxicidad). Se trabajó con cinco concentraciones de extracto proteico (0.5, 1, 50, 500, 1000 ng/100 ìl) en una población de 500 000 leucocitos/ml incubados por 1 y 12 horas en un medio de cultivo a 37 ºC. Se determinó la viabilidad celular por exclusión con azul de tripán y la degranulación de enzimas leucocitarias (mieloperoxidasa y glucosaminidasa) mediante electroforesis en geles de poliacrilamida y transferencia a membranas de nitrocelulosa (Western blotting). El recuento de células a 1 h de incubación demostró una alta mortalidad (57.7 a 58.1%), siendo a las 12 h entre 65.2 y 99.4%, y sin diferencia estadística entre las medias del número de leucocitos que sobreviven a cada tratamiento. La mortalidad en el grupo control de suero fisiológico alcanzó 5 y 57% a 1 y 12 h de incubación, respectivamente. En la degranulación de leucocitos se observó la secreción de proteínas diferentes a aquellas en el grupo control inoculado con suero fisiológico, evidenciado por la tinción de bandas en las membranas de transferencia. Se concluye que el extracto proteico de macroquistes de S. aucheniae es altamente citotóxico para los leucocitos de conejo y se observa la secreción de proteínas.
The aim of this study was to determine the in vitro toxic effect of the protein extract of macrocysts of Sarcocystis aucheniae on circulating rabbit leukocytes (cytotoxicity). Five concentrations of the protein extract (0.5, 1, 50, 500, 1000 ng/100 μl) were exposed to a population of 500 000 leukocystes/ml for 1 and 12 h in a culture medium at 37 °C. The cell viability was evaluated by trypan blue exclusion and the enzyme degranulation of leukocytes (myeloperoxidase and glucosaminidase ) by polyacrylamide gel electrophoresis and transfered to nitrocellulose membranes (Western blotting). The cell count at 1 h of incubation showed high mortality (57.7 to 58.1%), whereas at 12 h varied from 65.2 to 99.4%, and without statistical differences between the mean of leukocytes that survive in each treatment. Mortality in the control group (saline) was 5 and 57% at 1 and 12 h of incubation respectively. On leukocyte degranulation the inoculated groups secreted different proteins than the control group inoculated with saline as evidenced by staining bands in controlling protein transfer membranes. It was concluded that the protein extract of S. aucheniae macrocysts is highly cytotoxic to rabbit leukocytes and protein secretion is observed.