ISOLATION AND GENOTYPING OF PORCINE RESPIRATORY AND REPRODUCTIVE SYNDROME VIRUS ON PIG FARMS IN LIMA AND AREQUIPA, PERU

• Autores: Ramírez V., Mercy, Rivera G., Hermelinda, Manchego S., Alberto, More B., Juan, Chiok C., Kim Lam
• Formato: artículo
• Fecha de Publicación: 2013
• Institución: Universidad Nacional Mayor de San Marcos
• Repositorio: Revista UNMSM - Revista de Investigaciones Veterinarias del Perú
• Lenguaje: español
• OAI Identifier: oai:ojs.csi.unmsm:article/2512
• Enlace del recurso: https://revistasinvestigacion.unmsm.edu.pe/index.php/veterinaria/article/view/2512
• Nivel de acceso: acceso abierto
• Materia: porcine; Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome virus; PRRS; ARN virus; genotype; RT-nPCR; Porcine Alveolar Macrophage cell line; Porcino; virus del Síndrome Respiratorio y Reproductivo Porcino; virus ARN; genotipo; células de macrófagos alveolares de porcino.

The aim of this study was to isolate and genotyping the Porcine Respiratory and Reproductive Syndrome Virus (PRRSV) strain in pig farms in Lima and Arequipa, Peru. Seropositive pig farms to PRRSV were identified by ELISA test. Blood samples were collected from weaned pigs from positive pig farms in Lima (A=44, B=20; C=16) and Arequipa (D=32, E=92). The serum samples (n=204) were processed in 51 pools of 4 samples each for virus isolation using Porcine Alveolar Macrophage (PAM) cell line. The genome of the virus isolated was identified by Reverse Transcription-nested Polimerase Chain Reaction (RT-nPCR). The complementary DNA (cDNA) of genotype 1 and 2 of PRRSV vaccine strains were used as positive controls and cDNA of equine viral arteritis virus, classical swine fever virus and PAM cells as negative controls in the RT-nPCR. Three blind passages in PAM cell line with each of the 51 pool were done before searching PRRSV antigen by Immunofluorescence test. The 19.6% (10/51) of samples were positive to viral antigen by IF. The 70% (7/10) of the isolated strains had no cytopathic effect. Eight out of ten positive samples were confirmed as PRRSV using RT-nPCR test and 1 of the 41 negative samples was positive to PRRSV by RT-nPCR. The 17.6% (9/51) of isolated were positives to PRRSV using primers that recognize the common genomic sequence to genotype 1 and 2 of PRRSV. All the PRRSV strains confirmed by RT-nPCR test belonged to genotype 1. This is the first evidence of genotype 1-European of PRRSV in pig farms in Peru.
El objetivo del presente estudio fue aislar e identificar el genotipo de las cepas del virus del Síndrome Respiratorio y Reproductivo Porcino (VPRRS) de granjas porcinas de las provincias de Lima y Arequipa. Se identificaron granjas porcinas seropositivas al VPRRS mediante la prueba de ELISA. Se colectaron muestras de suero de porcinos en etapa de recría, engorde y acabado de tres granjas de Lima (A=44, B=20, C=16) y dos de Arequipa (D=32, E=92) en 2010. Las 204 muestras fueron procesadas en 51 mezclas de 4 muestras cada una, respetando el lugar de procedencia, para el aislamiento viral en el clon 3D4/31 de la línea celular de macrófago alveolar porcino (PAM). La identificación del genoma viral se realizó mediante la técnica de Transcripción Reversa Reacción en Cadena de la Polimerasa tipo anidada (RT-nPCR). El ADN complementario (ADNc) de cepas vacunales del VPRRS del genotipo 1 y 2 fueron utilizados como controles positivos y ADNc de los virus de la arteritis viral equina y peste porcina clásica y de las células PAM como controles negativos en la técnica de RT-nPCR. Se realizaron tres pasajes ciegos en la línea celular PAM con las 51 mezclas de suero antes de ser procesadas para la búsqueda de antígeno del VPRRS mediante la técnica de inmunofluorescencia directa (IF). El 19.6% (10/51) de las muestras de suero resultaron positivas al aislamiento viral por IF. El 70% (7/10) de las cepas aisladas no presentaron efecto citopático. De los 10 aislados positivos, 8 fueron confirmados como VPRRS por la técnica de RT-nPCR y 1 de las 41 mezclas negativas por IFD fue positiva al VPRRS por RT-nPCR. El 17.6% (9/51) de las muestras resultaron positivos al VPRRS utilizando los cebadores que reconocen a la secuencia génica común al genotipo 1 y 2 del VPRRS. Todas las cepas del VPRRS confirmadas por la técnica de RT-nPCR pertenecieron al genotipo 1. No hubo amplificación del ARN de los controles negativos. Esta es la primera evidencia del genotipo 1 del VPRRS en granjas porcinas en el Perú.