Estudio de la funcionalidad de la proteína del síndrome de Werner (WRN) en la maquinaria traduccional y alteraciones moleculares derivadas de su silenciamiento en células HeLa - Fossati Jara, Diego Matia Antonio (2018)
El presente trabajo tuvo como finalidad evaluar la relación funcional de la proteína del Síndrome de Werner (WRN) con la maquinaria traduccional en células HeLa depletadas para WRN. Se utilizó el sistema lentiviral inducible en células HeLa para desregular la expresión de WRN y realizar los posteriores análisis de qPCR y Western Blot. Así mismo, se utilizó el sistema de expresión de baculovirus y el sistema de transcripción/traducción para expresar la proteína WRN. Finalmente, se realizaron los ensayos de traducción in vitro utilizando vectores reporteros. Se localizó la presencia de la proteína WRN en la fracción citoplasmática y polisomal. Además, no se encontraron diferencias entre la expresión de los ARNm de las proteínas ribosomales RPS6, RPL7a entre las células HeLa carentes de WRN y células HeLa control. Sin embargo, se encontró un aumento de ~3 veces (326%) más de la expresión de los ARNm de IDH1 en células HeLa debido quizás al estrés celular. Adicionalmente, los ensayos de traducción in vitro entre células HeLa depletadas para WRN y células control, lograron determinar que la ausencia de WRN da como resultado una disminución en la traducción de proteínas (65% menos con respecto al control) y con el uso del inhibidor de la actividad helicasa de WRN NSC-19630 (67.5% menos con respecto al control). La depleción de WRN no altera la expresión de los ARNm y las proteínas ribosomales RPS3, RPS6 y RPL7A. Así mismo, se demostró que la proteína de WRN presenta una función en la traducción de proteínas al comparar los niveles de traducción de proteínas reporteras en células HeLa shWRN y shCTR, y mediante la inhibición de la actividad helicasa de WRN