“Inserción del gen RB en las variedades Revolución y Désirée de Solanum tuberosum para conferir resistencia a Phytophthora infestans.“ - Serna Chumbes, Manuel Fernando (2011)
Con el fin de introducir el gen RB que confiere resistencia al tizón tardío se desarrollaron dos construcciones genéticas, la primera sólo con el gen de interés (RB) y la segunda con el gen de interés y un gen de resistencia a kanamicina, que sirvió como marcador de selección. Ambas construcciones fueron usadas para transformar mediante Agrobacterium tumefaciens, explantes de Solanum tuberosum de las variedades Revolución y Désirée Se desarrollaron medios para propagación y regeneración de las plántulas de Revolución, y se determinó la concentración de antibiótico necesaria para la selección de los explantes transformados y la eliminación de Agrobacterium. Se realizaron los eventos de transformación con la primera construcción carente del gen marcador de selección; por lo cual, la mayoría de los explantes regeneraron. Los regenerantes fueron analizados por PCR y se obtuvieron 7 líneas posiblemente transgénicas, pero en los resultados con Southern blot resultaron negativas. De la transformación con la segunda construcción, en la variedad Désirée se obtuvieron 12 plantas putativamente transgénicas que fueron luego analizadas por Southern blot confirmando que 10 de ellas eran transgénicas y contenían el gen de interés. In order to insert the RB gene conferring resistance to late blight, two genetic constructs were developed. The first construct only contains the gene of interest (RB) and the second construct, the gene of interest plus a kanamycin resistance gene, which served as a selection marker. Both constructs were used to transform explants of Solanum tuberosum, Désirée and Revolution varieties, by Agrobacterium tumefaciens. Culture medium were developed for propagation and regeneration of Revolution´s seedling. Concentration of required antibiotic to select transformed explants and eliminate Agrobacterium were also determined. Transformation events were conducted with the first construct lacking the selection marker gene. As a result, most of the explants were regenerated. PCR was used to analyzed the regenerants and 7 lines were candidates to be transgenics. However, Southern blot analisys ruled out this posibility. Transformation events with the second construct, in the Désirée variety, resulted in 12 putative transgenic plants. PCR and Southern blot analisys confirmed that 10 of them were transgenic and contained the gene of interest.