Amplificacion por polimerasas y recombinasas (RPA) y PCR en tiempo real (qPCR) para su validacion en el diagnostico molecular de fasciolasis humana. Cusco 2017 - Malaga Granda, Jose Luis (2017)
Fasciolasis es la infección por trematodos más ampliamente distribuida en el mundo. En el Perú la Fasciolasis humana es considerada una enfermedad parasitaria reemergente e hiperendémica. El diagnóstico de Fasciolasis humana sigue siendo un problema debido a la poca sensibilidad de los métodos parasitológicos empleados así como a las precarias condiciones de salud en zonas rurales donde la Fasciolasis manifiesta su verdadero impacto. En el presente trabajo de investigación se desarrollaron y validaron dos pruebas de diagnóstico altamente sensibles y específicas para la detección de Fasciolasis humana: la reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real q(PCR) y un método de amplificación por Polimerasas y Recombinasas (RPA). El q(PCR) así como el RPA mostraron un límite de detección (LOD) de 1.6 pg/µl de ADN de Fasciola hepatica, ambas pruebas no mostraron reacciones cruzadas en el análisis in-sílico así como con ADN de: Schistosoma mansoni, T solium, Ascaris lumbricoides, Uncinarias, Trichuris trichura, Hymenolepis nana, Strongyloides stercoralis. La sensibilidad del q(PCR) y el RPA fueron de 66% y 87% respectivamente. Ambas pruebas mostraron una elevada especificidad del 100%. El RPA después de ser adaptado a una plataforma de detección de flujo lateral, demostró una sensibilidad del 95.23% y una especificidad del 90.5%. En conclusión, el q(PCR) y el RPA son pruebas altamente sensibles y específicas para diagnosticar la infección crónica de Fasciola hepatica usando muestras de heces. El RPA de Fasciola adaptado a las tiras de flujo lateral tiene el potencial para el despliegue de la prueba en áreas endémicas con recursos limitados.