Caracterización molecular de fosfolipasa A de Campylobacter jejuni aislado de pollos de carne - Jiménez Aliaga, Karim Lizeth (2007)
Con el objetivo de caracterizar la fosfolipasa A de la membrana externa (OMPLA E.C. 3.1.1.32) de Campylobacter jejuni aislado de pollos de carne, se estandarizaron métodos para el aislamiento e identificación de la bacteria a partir de hisopados rectales de aves comerciales. Para ello, primero se analizó la presencia de C. jejuni en hisopados cloacales mediante técnicas bacteriológicas y la reacción en cadena de la polimerasa anidada en base a los genes ribosómicos 16S e hipO, las cuales permitierón detectar Campylobacter jejuni en 29/50 (58%) y 48/50 (96%) de las muestras respectivamente. Después, se determinó la secuencia nucleotídica de los genes ribosómicos 16S y flaA del aislado MP4 con la finalidad de tener una cepa nativa de C. jejuni bien caracterizada que se utilice como modelo de estudio para la fosfolipasa A, las secuencias nucleotídicas de estos dos genes mostraron 98% y 92% de similiitud nucleotídica con las de Campylobacter jejuni subs. jejuni ATCC 33560. Las actividades hemolítica y de fosfolipasa A de C. jejuni MP4 fue dependiente de calcio, cuando este ión se reemplazó con EDTA, las actividades disminuyeron de 4119.4 a 44.78 U/mg de proteína. Utilizando cebadores específicos se amplificó y secuenció la parte central del gen pldA de C. jejuni MP4, se obtuvo 225 nucleótidos y 75 aminoácidos. La comparación de la secuencia aminoácidica por el ClustalW mostró 99% y 98% de identidad con las proteínas OMPLA de las cepas de Campylobacter jejuni RM1221 y C.jejuni subsp. jejuni ATCC 33560 respectivamente; esta alta conservación de secuencia aminoacídica de la fosfolipasa A la convierte en una candidata potencial para el diseño de vacunas y pruebas diagnósticas.