Identificación, producción, purificación y caracterización de la amilasa producida por la cepa bacteriana termófila A-8 - Bornás Acosta, Soledad Amparo (2022)
En el presente estudio se identificó y describió la morfología y bioquímica de la bacteria termófila A-8; se optimizó el medio fermentativo para la producción de amilasa termoestable; purificó y caracterizó la cinética enzimática. Esta cepa presentó mayor relación de identidad con la especie Geobacillus kaustophilus; bacilo Gram positivo que produce endosporas elipsoidales subterminales. Su temperatura óptima de crecimiento fue de 60°C. Puede utilizar el acetato de sodio como única fuente de carbono. Metaboliza glucosa por vía ácido mixta y es capaz de formar ácidos a partir de azúcares simples e hidrolizar almidón. La composición del medio fermentativo optimizado en % (p/v): MgSO4 0,05; NaCl 0,15; CaCl2 0,01; KH2PO4 0,1; peptona 1,5; cáscara de papa 1,2158; inóculo bacteriano 5 % (v/v) (DO 1,0 en caldo LB) y sus condiciones de cultivo: pH 7,0 ± 0,2 incubación 60 °C y agitación orbital de 70 rpm por 30 horas permitieron obtener una actividad de 9,20 U/mL y un rendimiento de 757,36 U/gss que es 181,24 veces con relación al rendimiento inicial. La amilasa se purificó 4,67 veces con una actividad específica de 193,52 U/mg de proteína. La actividad catalítica máxima de la amilasa se alcanzó con un pH óptimo de 5 y una temperatura óptima de 80 °C. Además, conserva hasta ~40% de actividad residual frente a tiempos de exposición de 300 minutos a 50, 60 y 70 °C. La Vmax fue 8,20 μmol/min/mL y su Km fue 3,60 mg/mL. Finalmente, se propone a la enzima para el desarrollo de futuras tecnologías.