Clonación molecular y caracterización de la Acetil-Coa Carboxilasa (ACCasa) de Ankistrodesmus sp. una enzima clave para la biosíntesis de ácidos grasos - Rodriguez Mashacuri, Hicler Napoleon (2017)
Las microalgas, son microorganismos fotosintéticos procariotas y eucariotas, que producen diversos compuestos de interés comercial e industrial, debido al alto contenido de lípidos que poseen, entre los que destacan los ácidos grasos libres, que es de gran importancia para obtener biodiesel. Sin embargo, los estudios moleculares no son claros sobre la biosíntesis de ácidos grasos y la función de los genes involucrados en las vías metabólicas en microalgas. Es por ello, el objetivo del trabajo fue realizar la clonación molecular y caracterización de ACCasa de Ankistrodesmus sp., una enzima clave para la biosíntesis de ácidos grasos. El ARN total se purificó por métodos estandarizados en el laboratorio. Posteriormente se realizó el secuenciado transcriptomico. De la data obtenido, se identificó y se caracterizó una fracción del gen de ACCasa, la subunidad α por análisis bioinformático. La secuencia del gen identificada fue optimizada y expresada en E. coli, y ligada al vector de expresión pET151/D-TOPO, para el transformado de E. coli por electroporación. Finalmente, se purifico el plásmido recombinante y el gen insertado se verificó por PCR. El ARN total, tuvo ratios de calidad entre 1.95 y 2.01, la secuencia del gen αACCasa fue de 1491 pb y 491 aminoácidos. El plásmido recombinante fue de ~7236 pb, y el tamaño del amplicon fue ~119 pb. En conclusión, se purifico el ARN de alta calidad, se clonó y se caracterizó el gen αACCasa de Ankistrodesmus sp.