Evaluación In Vitro del Efecto Neurotóxico Ocasionado por Plomo y Manganeso Individualmente y en Combinación, a través de un Marcador de Lesión (Ldh) y Viabilidad Celular en Neuroblastoma de Rata (Línea Celular B35). - Rodríguez Márquez, Carmen Lucía (2019)
La neurotoxicidad describe los cambios neurológicos ocasionados por la exposición a agentes tóxicos, lo que puede resultar en cambios cognitivos, desórdenes de la memoria, cambios de humor o hasta el comienzo de perturbaciones psiquiátricas. Entre los agentes tóxicos más comunes tenemos a: los metales pesados, órgano fosfatos, neurotoxinas animales y de bacterias El propósito de este estudio fue evaluar los efectos neurotóxicos del plomo y manganeso, individualmente mediante la viabilidad en células de neuroblastoma de rata, línea celular B-35, además de determinar si existe sinergismo entre ambos metales y corroborar el daño celular, mediante la medición de la actividad de la enzima Lactato Deshidrogenasa (LDH). Para determinar la citotoxicidad, se utilizó la enzima Lactato deshidrogenasa (LDH), enzima citosólica, presente en diversas células, como las neuronas, por lo tanto, al existir un daño en la membrana plasmática se libera LDH en el cultivo celular, lo que resulta en la formación de formazán, que es directamente proporcional a la citoxicidad. En el presente trabajo de investigación, todos los ensayos se realizaron por triplicado Para la prueba de viabilidad, las células B-35 se cultivaron en el medio DMEM en placas de 96 pocillos, que reposaron en la incubadora a 37⁰C y condiciones de 5% CO2 durante 3 días para su óptimo crecimiento; luego se trataron con concentraciones de 100μM, 75μM, 50μM, 25μM, 10μM, 5μM, 2.5μM, y 1μM de Pb(NO3)2 (Nitrato de Plomo). En otras placas, se replicó el mismo procedimiento, con la diferencia que a éstas células se les aplicó Mn(NO3)2 (Nitrato de Manganeso) a concentraciones 100μM, 75μM, 50μM, 25μM, 10μM, 5μM, 2.5μM, y 1μM. Posteriormente, se llevaron las células a la incubadora, para mantenerlas a 37⁰C y 5% CO2, por un periodo de 69 horas, al completar el tiempo, las células fueron llevadas a una cámara de bioseguridad, en donde, se les adicionó 10μl de MTS, con el fin de determinar la actividad metabólica celular. Por último se realizaron las respectivas lecturas, en el lector de microplacas. Para la determinación de sinergismo, se procedió de la misma manera que en la prueba de viabilidad, se cultivaron las células B35 en el medio DMEM, luego fueron llevadas a la incubadora, por 3 días, la diferencia estuvo en el tratamiento, el cual consistió en la combinación de ambos metales Pb(NO3)2 y Mn(NO3)2, a concentraciones de 0.5μM, 2μM, 4μM, 6μM, 8μM y 10μM. Luego se adicionó los 10μl de MTS y se realizaron las lecturas correspondientes. Se determinó que el plomo a las 72 horas, a partir de una concentración de 5μM, mientras que el Mn a partir de una concentración de 10μM disminuyen significativamente la viabilidad, aumentando el daño celular y en el caso de la combinación de ambos metales, en sus respectivas concentraciones, se evidenció un efecto sinérgico positivo, el cual disminuye aún más la viabilidad celular, lo que causa la reducción del crecimiento de los axones neuronales, probablemente afectando la señalización y transmisión eléctrica entre neuronas. Palabras clave: Toxicidad de Plomo, toxicidad de Manganeso, sinergismo de Plomo, sinergismo de Manganeso, determinación de citotoxicidad.